Островок btb: Наши контакты – help.b2b.ostrovok.ru

Бронирование отелей – help.b2b.ostrovok.ru

/База знаний [email protected]

1. help.b2b.ostrovok.ru
2. Бронирование отелей

• ★ Наши контакты
• Как использовать промокод?
• Как забронировать отель с оплатой на месте?
• Как оплатить картой заказ в личном кабинете?
• Как забронировать услугу «Ранний заезд/Поздний выезд»?
• Где найти договор?
• Информация об отелях, представленная на сайте b2b.ostrovok.ru
• Как минимизировать штрафы по заказам?
• Как поменять пароль?
• Как скачать счет на оплату?
• Как добавить пользователя?
• Где скачать закрывающие документы?
• Как добавить комментарии к заказу?
• Как отменить заказ?
• Как заказать трансфер?
• Как изменить бронирование (продлить/сократить)?
• Как добавить питание к бронированию?
• Как забронировать два или более номеров в одном заказе ?
• Лучше бронировать по одному номеру или сразу несколько в заказе?
• Оплата не распределилась на заявку/у меня есть переплата, что делать?
• Как оплатить заказ картой во время бронирования?
• Есть ли комиссия за оплату по карте?
• Как оплатить снами?
• Почему мне не начислены сны?
• Не нашли на сайте нужный отель/категорию номера – что делать?
• Бронирование групп (от 6 номеров)

Инвесторам приглянулся Ostrovok – Газета Коммерсантъ № 52 (5084) от 27.

03.2013

Сервис бронирования гостиниц в интернете Ostrovok.ru привлек $25 млн от инвесторов, среди которых фонды General Catalyst, Accel Partners, Frontier Ventures, менеджеры Credit Suisse и Альфа-банка, а также Юрий Мильнер. Это крупнейшая сделка на российском рынке онлайн-путешествий, объем которого в этом году превысит $10 млрд.

О том, что Ostrovok.ru закрыл очередную сделку по привлечению капитала, «Ъ» рассказал источник, знакомый с ходом переговоров. Эту информацию подтвердил сооснователь Ostrovok.ru Кирилл Махаринский. По данным «Ъ», лид-инвестором выступил международный венчурный фонд General Catalyst Partners, который вместе с Accel Partners, Atomico и рядом других инвесторов уже вложил в развитие ресурса в июле 2011 года $13,6 млн (весь Ostrovok.ru тогда был оценен более чем в $35 млн).

В новом раунде на $25 млн также принял участие текущий совладелец Accel Partners, соинвесторами выступили Frontier Ventures Дмитрия Алимова, а также известный интернет-инвестор Юрий Мильнер. Кроме них свои личные деньги в Ostrovok.ru вложили бывший гендиректор Expedia Эрик Блечфорд; основатель Room77 Брэд Герстнер; гендиректор «Credit Suisse Россия» Стив Хеллман; венчурный инвестор из Кремниевой долины Шервин Пишевар; бывший управляющий директор UBS и глава инвестблока Альфа-банка Эдуард Кауфман. Структура акционерного капитала не раскрывается, но, по информации «Ъ», контрольный пакет ресурса остался у его основателей Кирилла Махаринского и Сергея Фаге.

Полученные инвестиции Ostrovok.ru намерен направить на развитие существующих и новых продуктов — например на бронирование отелей на партнерских площадках, отмечают в компании. В частности, API (интерфейс программирования приложений) Ostrovok.ru сейчас уже используют «МегаФон», HotelsCombined, TripAdvisor, аэропорт Шереметьево, Aviasales, Kayak. Увеличится и служба поддержки, особое внимание будет уделено продукту, сервису, маркетингу и бренду, партнерам и подключению новых отелей. Пока еще сервис будет фокусироваться на гостиницах, но уже в следующем году компания начнет «экспериментировать с другими продуктами, дополняющими бронирование отелей», говорит господин Махаринский.

Ostrovok.ru создан в конце 2010 года Сергеем Фаге и Кириллом Махаринским, сооснователями компаний Tokbox, YouNoodle и Quid. База компании насчитывает 135 тыс. отелей в 200 странах мира и 4,8 тыс. отелей в России и СНГ. Средний чек — $350. По собственным данным компании, ежемесячная аудитория — около 1 млн уникальных посещений. Зарабатывает за счет комиссии от отелей, которая составляет примерно 15%. Финансовые показатели не раскрываются.

Онлайн-трэвел считается одним из самых привлекательных направлений в российском e-commerce. К примеру, Oktogo.ru — ближайший конкурент Ostrovok.ru — в марте закрыла уже третий инвестраунд (в сумме компания привлекла $26 млн). Лидеры рынка бронирования авиабилетов также стабильно привлекают инвестиции. В частности, OneTwoTrip в прошлом году получила в сумме $25 млн от Phenomen Ventures и Atomico, а Anywayanyday.com продала за $10 млн 40% компании в 2010 году Tiger Global Management и готовит очередную сделку на $40 млн.

Основатель туристического метапоисковика Jizo.ru Сергей Лаврентьев считает, что Ostrovok.ru необходимо охватить небольшие города России с населением от 20-30 тыс. жителей. «Спрос будет, и если эту сложную задачу удастся решить, то можно зарабатывать сопоставимые с зарубежными топ-направлениями деньги и к тому же продавать свои базы отелей большим иностранным игрокам типа Expedia или Booking.com»,— рассуждает он.

По мнению гендиректора Ozon.Travel Дмитрия Яковлева, Ostrovok.ru потребуются существенные усилия в B2B и высокие затраты на маркетинг не только для того, чтобы оттянуть от себя часть клиентов Booking.com и создать сильный бренд, но и чтобы приучить пользователей бронировать самостоятельно онлайн.

По оценкам Ozon.Travel, в 2012 году в онлайне было реализовано (как через сайты агентств, так и через сайты авиакомпаний) авиабилетов на $4 млрд, железнодорожных билетов — на $0,7 млрд, гостиниц — на $0,5 млрд, а весь рынок онлайн-трэвел в 2013 году может вырасти на 80%. Сегмент интернет-бронирования гостиниц к 2015 году превзойдет $3 млрд, оценивала ранее гендиректор и основатель Oktogo.

ru Марина Колесник.

Роман Рожков

B2b.ostrovok.ru Site

Бронирование отелей для корпоративных клиентов — B2B …

B2b.ostrovok.ru B2B.Ostrovok — онлайн-сервис бронирования отелей и авиабилетов для турагентов и корпоративных клиентов. Низкие цены. Гибкие условия оплаты. Более 1,3 млн отелей. Заказ трансферов и авто без водителя.

B2B.ostrovok.ru — корпоративное бронирование отелей для …

B2b.ostrovok.ru Публикуем статьи о том, как составлять маршруты, искать отели и собираться в дорогу. Путешествия сбываются.

Ковид-19 по регионам РФ — статус регионов с COVID-19, список

B2b.ostrovok.ru Информация по регионам может измениться, так что перед бронированием и поездкой обязательно проверьте данные на официальной странице нужного региона.. Мы стараемся оперативно обновлять информацию, но если у вас …

Долгожданное обновление: услуга «Ранний заезд / Поздний …

B2b.ostrovok.ru Как это работает 1. В специальном разделе формы поиска укажите, что вам нужен ранний заезд и/или поздний выезд и время.

Перспективы «шведского стола» в пост-пандемию

B2b.ostrovok.ru Каждый причастный к туризму знаком с понятием «шведский стол» и может по достоинству оценить его преимущества: для отельеров это обслуживание большего числа людей, систематизация работы поваров и, конечно же …

Турагенты рассказали, что волнует путешественников при …

B2b.ostrovok.ru В последние недели сразу несколько стран объявили об отмене карантина для россиян, а значит, заграничные путешествия к морю становятся всё реальнее. Аналитики сервиса онлайн-бронирования отелей и авиабилетов для …

Власти Черногории разъяснили правила въезда для россиян

B2b.ostrovok.ru Гражданам России, планирующим отдых в Черногории, нужно предоставить один из следующих документов:. Отрицательный результат ПЦР-теста на коронавирус, сделанный не ранее чем за 72 часа до приезда.

Кто такой куратор и что он делает

B2b.ostrovok.ru Ежедневно мы работаем с большим количеством партнёров и подрядчиков. И случается так (по нашей собственной вине, по вине партнёра или просто в силу обстоятельств), что надо куда-то бежать, в какое-то окно стучать, а мы …

В «Личном кабинете» появилась оплата картой

B2b.ostrovok.ru Важная информация. Картой можно оплатить только заказы в рублёвой валюте. Картой можно оплатить заказ, в котором только одно бронирование (или одно бронирование с дополнительными услугами для него).

Длительность командировки: на сколько дней можно …

B2b.ostrovok.ru Разбираем, можно ли отправить сотрудника в командировку на несколько часов, в чём особенность длительных поездок и как не поп…

Как пройти регистрацию на B2B.Ostrovok — пошаговая …

B2b.ostrovok.ru Шаг 1: общие сведения. На этом этапе нужно указать имя и фамилию, электронный адрес, контактный номер телефона, название вашей компании и город, в котором находится ваш офис.

Главные правила поведения в отеле

B2b.ostrovok.ru Соблюдение дресс-кода. Дресс-код зависит от отеля и может варьироваться: в более дорогих гостиницах на ужин необходимо приходить в рубашках, брюках и …

Греция полностью откроется для туристов в мае

B2b.ostrovok.ru Для въезда россиянам достаточно предъявить один из документов: сертификат полной вакцинации от covid-19, отрицательный результат ПЦР-теста или доказательство наличия антител после перенесённой болезни.

Теперь авиабилеты можно оплачивать картой

B2b.ostrovok.ru Добавили новый способ оплаты авиабилетов и рассказываем, как воспользоваться им при заказе. Как оплатить авиабилеты кар…

Дайджест услуг B2B.Ostrovok: спектр возможностей

B2b.ostrovok.ru Наша задача — сделать всё возможное, чтобы организация поездок была быстрой и удобной, а путешествие — комфортным. Спектр усл…

Промокод в подарок всем партнёрам

B2b.ostrovok.ru Это наш способ сказать вам спасибо за то, что пользуетесь инструментом B2B.Ostrovok для поиска выгодной цены — расширением дл…

Как работает отдел группового бронирования

B2b.ostrovok.ru Про отдел индивидуального бронирования мы рассказывали в прошлой статье, теперь очередь нашей второй палочки-выручалочки, к которой мы все обращаемся в сложных случаях — отдела группового бронирования.

О преимуществах трансферов на B2B.Ostrovok

B2b.ostrovok.ru В чем выгода B2B.Ostrovok для агентов. Простота оформления: выберите вкладку «Трансфер» на главной странице, укажите маршрут, дату и время подачи автомобиля.; Возможность быстрого бронирования: вы можете забронировать …

Специальное предложение по трансферам

B2b.ostrovok.ru С 22 марта по 19 апреля 2021 года мы снижаем цены на трансферы в Москве, Санкт-Петербурге, Сочи, Красной Поляне, Дубае, Стамбуле, Пунта-Кане и Канкуне.. Дата поездки может быть любой, главное — забронировать трансфер во …

В Таиланде смягчают правила карантина для туристов

B2b.ostrovok.ru Тайский Центр управления ситуацией с covid-19 утвердил новые правила карантина для …

Болгария откроется для туристов с 1 мая

B2b.ostrovok.ru Министр туризма Болгарии Мариана Николова подтвердила, что страна откроется для иностранных туристов с 1 мая 2021 года. Ст…

Авиабилеты на B2B.Ostrovok

B2b.ostrovok.ru Отели, машины, конференц-залы, а теперь и авиабилеты на B2B.Ostrovok.ru! Всё необходимое для путешествия ваших клиентов по выгодным ценам на одной платформе для travel-профессионалов! Долгожданный сервис освободит вас от …

Абу-Даби ослабил требования для туристов

B2b.ostrovok.ru С 24 декабря 2020 года власти Абу-Даби изменили ряд требований для въезжающих в эмират. Решение принято в связи с нормализаци…

В каких странах нужны международные права и как их получить

B2b.ostrovok.ru В каких странах требуется международное водительское удостоверение. Какой вид прав принимается в стране, зависит от того, какую конвенцию эта страна подписала.

Как перевозить горнолыжное оборудование

B2b.ostrovok.ru Отправляясь на горнолыжные курорты, многие оставляют дома родную экипировку и берут снаряжение в аренду, только чтобы не стал…

Как отменить бронирование в случае форс-мажорной ситуации

B2b.ostrovok.ru Пожалуйста, обратите внимание. Время ответа службы поддержки увеличилось, так как путешественники меняют планы из-за ограничений, связанных с коронавирусом (covid-19), и сейчас мы обрабатываем большое количество запросов.

Встреча с водителем – help.b2b.ostrovok.ru

Help.b2b.ostrovok.ru Как пассажир найдёт водителя? Водитель будет встречать пассажира с табличкой, на которой указаны фамилия и имя пассажира, в зоне прилёта или прибытия. Если пассажира забирают в отеле, апартаментах …

Новая версия API: что изменилось

B2b.ostrovok.ru Рассказываем, что изменилось по сравнению с предыдущей версией, и как это поможет вам в работе с нашим продуктом. «Ранн…

Где найти договор? – help.b2b.ostrovok.ru

Help.b2b.ostrovok.ru В «Личном кабинете» B2B.Ostrovok вы можете скачать договор в формате PDF. Для этого: Авторизуйтесь на сайте и нажмите на кнопку «Личного кабинета». Перейдите в «Настройки контракта» и откройт…

Подборка отелей по районам Сочи

B2b.ostrovok.ru Сочи — необыкновенный город, который стремительно развивается и выходит на уровень европейских курортов. Здесь прекрасно в лю…

Как забронировать отель с оплатой на месте? – help.b2b …

Help.b2b.ostrovok.ru 1. На странице поиска найдите фильтр «Оплата на месте». После этого в поисковой выдаче отобразятся только те отели, где доступна оплата картой при заселении. При настройках по умолчанию отобразятся…

Мы запустили мобильное приложение B2B.Ostrovok

B2b.ostrovok.ru Как начать работу в приложении. Скачайте приложение из Google Play, если ваш телефон работает на базе Android, или из App Store, если у вас iPhone.; Откройте приложение и введите ваш логин и пароль.

Как подготовиться к командировке во время пандемии

B2b.ostrovok.ru Изучить правила въезда. Зарубежная командировка будет возможна только в том случае, если страна назначения разрешила въезд российских граждан по бизнес-вопросам или, к примеру, границы открыты на взаимной основе …

Германия ужесточила правила въезда

B2b.ostrovok.ru Германия все ещё закрыта для туристов, въехать в страну можно с деловыми или медицинскими целями.

Как авиакомпании обеспечивают эпидемиологическую …

B2b.ostrovok.ru S7. В пандемию авиакомпания запустила программу S7 Care. Одна из инициатив под названием «Врачи на борту» даёт привилегии медицинским работникам, которые в случае необходимости смогут оказать первую помощь пассажирам …

Пхукет откроется для вакцинированных путешественников

B2b.ostrovok.ru С 1 июля 2021 года вакцинированные туристы смогут посещать Пхукет без прохождения карантина. Для въезда необходимо предъя…

Островок Россия — Отзывы сотрудников компании

2020-03-16 13:58 Никнейм: Менеджер по продукту, г. Москва

Островок уже большая компания, но которая сохранила человеческое лицо, а именно: — Тесное общение с топ-менеджментом компании по любым вопросам. — Возможность роста по карьерной лестнице начиная со стажера до управленческой позиции. Причем вокруг люди заинтересованны в этом, но при условии если ты реально тащишь. — Тут работают приятные и хорошие люди. Многие больше нескольких лет. Довольно-таки много тех кто больше 5 лет. Легко найдешь с кем поиграть в волейбол или полететь отдыхать.…>> Ничего серьезного.

2019-10-23 10:26 Никнейм: Сотрудник, г. в Московской области

Нет Островок нам отправил гостей в наш апартамент (Apartment City Igalo) в Черногорию (июне месяце 2019), а самом начале нам сказали что оплата будет произведена несколько дней после выхода гостей из нашего апартамента. Месяц после этого нам сказали что оплатили но оплатили какому то Ivanisevic apartment (тот сказал что ничего ему не оплатили). На все мои вопросы на возникшую проблему они отвечали что их специалисти свяжутся со мной (видимо специалисты исчезли). После этого они мне отправили что оплатили…>>

2019-10-02 10:40 Никнейм: Оператор колл-центра, г. Москва

Поначалу прекрасная иллюзия А потом жестокая реальность. Посмотрите, какая там текучка кадров, и все станет понятно. Проходила собеседование на менеджера службы поддержки, в итоге определили работать оператором колцентра, сказав, что в менеджеры потом переведут. Полгода проработала, заговорила о переводе — сказали отлично, как хорошо. Через полтора месяца снова заикнулась о переводе — сказали, что надо думать о коллективе, а у меня эгоистичное «здесь и сейчас». И что некоторые ждут перевода по году. Работала…>>

2019-03-31 00:00

Никнейм: Менеджер по продажам, г.

Нетак давно устроилась вкомпанию островок вкачестве удаленного сотрудника менеджера попродажам. Привлекла удаленная работа, гибкий график, возможность практиковать иностранный язык. Наделе, ксожалению, практики языка вмоем отделе отказалось нетак много. + Ксчастью, вкомпании присутствует некая мобильность иможно перейти втот или иной смежный отдел, если освободиться вакансия, такое случалось даже замой небольшой срок работы. +Компания всячески поддерживает стремление сотрудников развиваться,…>>

Ксожалению, компания еще довольно молодая, хоть ибыстро развивающаяся. Есть определенные минусы. Очень часто недостаточно информации насайте, настраничках отелей, бывает ошибочная информация, из-за этого инциденты. Зачастую правда неповине островка, аповине отельера, который размешает наостровке свой отель. Это усложняет работу иомрачает общение склиентами. Были неприятные моменты струдоустройством из-за аутсорсинговой компанией, ноэто скорее мне неповезло, нежели закономерное явление.…>>

2019-02-06 00:00 Никнейм: Системный администратор, г. Москва

Все хорошо! Офис хорошо обустроен, коллеги все доброжелательные иотзывчивые. Руководство хорошее, всегда адекватно оценивают сроки ивозможности. Такое ощущение, что тут научились настолько хорошо управлять временем исчитать его, что если что-то нужно срочно, тоэто невызывает эмоцию опять, аскорее ого, покрайней мере, смоей точки зрения. Офис расположен удобно почти всамом центре Москвы. Отметро иавтобусных остановок 15 минут хода. Офис находится взоне увеличенного тарифа наплатную парковку,…>>

Накухне вобеденное время иногда собирается много людей, приходится ходить кушать позже привычного Вофисе бывает душно, ноэтот вопрос уже решается установкой доп вентиляции Из-за того, что офис сделан вформате оупенспейса, иногда бывает довольно шумно, отэтого спасают только наушники или поход вкомнату отдыха

2018-12-09 00:00 Никнейм: Аналитик, г.

Офис вцентре города, банковская система.

Устраивалась вбанк ВТБ. Прошла куча собеседований, тестирований, заставили прислать все копии документов иподписать согласие наобработку данных. Нопри этом наработу непринимают. ! !

2018-11-27 00:00 Никнейм: Cпециалист отдела фрод-м, г. Москва

1) Лояльное руководство, дружественный и молодой коллектив, отсутствие дресс кода, возможность гибкого графика работы 2) Масса корпоративных мероприятий, скидки на спорт и обучение, свой спортзал и душевые, бильярд, массажное кресло 3) Постоянно-развивающийся бизнес с введением новых процессов и технологий, которые не всегда слаженно работают, но решение таких вопросов и помогает развиваться 4) Возможности проявлять инициативу и развивать свои профессиональные навыки 5) Бесплатное питание…>> Здесь в норме нецензурная речь по поводу и без. После такого навыки делового этикета и уважительного общения могут атрофироваться.

2018-10-21 00:00 Никнейм: Аноним, г. Москва

Работаю в компании уже 6 лет. Для меня она уже стала вторым домом. Огромный плюс Островка в том, что ты всегда сможешь найти способы вырости профессионально и научиться чему-то новому, главное желание и твои усилия. Несомненно хочется также отметить потрясающий коллектив, который становится твоей второй семьей, всегда поддержит и поможет. Ну и третий безусловный плюс — корпоративная культура и забота руководства о своих сотрудниках Не сталкивалась

2018-10-15 15:49 Никнейм: Аноним, г. Москва

Корпоративная культура, все готовы помочь по любым вопросам, различные ништяки от компании, полный соц пакет, удобное расположение офиса, возможность работать удаленно и по гибкому графику. нет

2018-10-11 09:41 Никнейм: Reservations, г. Москва

Я не совсем понял почему бывшие коллеги пишут тут про маленькую зарплату. Вы же подписывали договор и согласны были на условия заранее? Тот кто может больше — получает больше. Зарплаты более чем конкурентно способные, коллектив — лучший из всех мест где я работал (а работал я много где) Начальство всегда поможет, грамотно и корректно укажет на недочеты в работе, и вообще работать в островке — одно удовольствие. Одно из лучших мест в России для трудоустройства — факт. Работаешь круто — с…>> Я не увидел минусов в работе, есть некоторые проблемы, но они обсуждаемы и решаемы, нет такого что бы тебя отправили со своими вопросами куда подальше — прислушиваются! И меняются, если проблемы есть. Подписаться

Ostrovok.ru нашел инвесторов на $25 млн

Ostrovok.ru создан предпринимателями Сергеем Фаге и Кириллом Махаринским, которые до этого учились в Стэнфордском и Оксфордского университетах, работали в Google и Slide и основали в Кремниевой долине компании Tokbox, YouNoodle и Quid. Средства, по словам Махаринского, будут потрачены на развитие продукта (приложения для iPhone, iPad, андроида, создание системы бронирования отеля на одну ночь), а также на поддержку клиентов: колл-центр компании, в котором сейчас порядка 40 человек, будет увеличен.

Ostrovok.ru не раскрывает свою выручку, но представитель компании сообщил Forbes данные об объеме заказов (букингов). В I квартале 2012 года через сайт Ostrovok.ru было произведено 4000 букингов, а в I квартале 2013-го — более 20 000. Кирилл Махаринский говорит, что средняя сумма заказа составляет $400.

Ostrovok.ru живет на комиссию — процент от заключенных сделок. Обычно она находится в пределах 10-20%, изредка чуть выше. Комиссия Ostrovok.ru, по словам Махаринского, 15%. Он говорит, что за 2012 год оборот сайта вырос на порядок.

В базе Ostrovok.ru сейчас 135 000 гостиниц по всему миру, но напрямую соглашения заключены примерно с 5000, с остальными сайт работает через партнеров. Задача, по словам основателей сайта, в том, чтобы увеличивать долю соглашений, заключенных напрямую.

Своим главным конкурентом в компании считает оффлайн, на который приходится 90% бронирований в России. Среди российских сайтов Махаринский выделяет Oktogo.ru. На этом сайте представлено более 250 000 отелей по всему миру. Ежемесячная аудитория Oktogo.ru, по данным самой компании, более 1 млн человек, конверсия (доля посетителей сайта, забронировавших отель) — от 1% до 1,5%. Средний чек такой же, как у Ostrovok.ru.

Оба сервиса пока являются убыточным. Генеральный директор Oktogo.ru Марина Колесник прогнозировала, что в этом году ее компания «может выйти на положительную рентабельность». Ostrovok.ru, по словам Махаринского, может стать окупаемым в 2014 году.

Банкоматы ВТБ 24 в Северодвинске

	ТЦ Беломорский (ВТБ 24)	пр-кт. Беломорский, 18/б,		RUR	24 часа
	магазин Островок (ВТБ 24)	пр-кт. Бутомы, 6,		RUR	24 часа
	ТЦ Октябрь ТС Пять шагов (ВТБ 24)	пр-кт. Бутомы, 9,		RUR	В режиме работы организации
	Северный Рейд (ВТБ 24)	пр-кт. Победы, 1,		RUR	В режиме работы организации
	ЖД вокзал г. Северодвинск (ВТБ 24)	ул. Железнодорожная, 3 б,		RUR	В режиме работы организации
	ОО Южный в г.Северодвинске (ВТБ 24)	ул. Железнодорожная, 50/1,		RUR	24 часа
	ОО Южный (ВТБ 24)	ул. Железнодорожная, 50/1,		RUR	24 часа
	УВД г.Северодвинска (ВТБ 24)	ул. Индустриальная, 26,		RUR	В режиме работы организации
	универсам 5 шагов (ВТБ 24)	ул. Лебедева, 8,		RUR	В режиме работы организации
	универсам 5 шагов (ВТБ 24)	ул. Ломоносова, 118,		RUR	В режиме работы организации
	Центральный Универмаг (ВТБ 24)	ул. Ломоносова, 81,		RUR	Круглосуточно
	ОО Корабельный (ВТБ 24)	ул. Ломоносова, 87/22,		RUR	24 часа
	ОО Корабельный (ВТБ 24)	ул. Ломоносова, 87/22,		RUR	24 часа
	ОО Корабельный (ВТБ 24)	ул. Ломоносова, 87/22,		RUR	24 часа
	магазин Россич (ВТБ 24)	ул. Мира, 15,		RUR	24 часа
	магазин Продукты (ВТБ 24)	ул. Портовая, 17А,		RUR	Круглосуточно
	универмаг Радуга (ВТБ 24)	ул. Советская, 56,		RUR	В режиме работы организации
	ТЦ Октябрь ТС Пять шагов (ВТБ 24)	ул. Труда, 30,		RUR	В режиме работы организации

Главред ТАСС: «островки безопасности» на митингах лишают журналистов возможности работать — Общество

МОСКВА, 10 марта. /ТАСС/. «Островки безопасности» на массовых мероприятиях стали бы ограничением для журналистов, освещающих их проведение. Об этом главный редактор ТАСС Михаил Петров заявил в среду на заседании комитета Госдумы по информационной политике, информационным технологиям и связи на тему «Обеспечение безопасности журналистов в ходе массовых мероприятий».

«Если мы говорим о каких-то «островках безопасности» и так далее — это все лишает журналиста возможности работать. Мои коллеги-журналисты меня точно поддержат: невозможно удержать фотографа или телеоператора от того, чтобы он не лез в гущу событий. Конечно, он будет охотиться за лучшими кадрами. Конечно, если есть какие-то важные медийные персоны, журналисты будут бегать за ними и пытаться взять их комментарий, интервью и так далее: в этом суть работы журналиста, невозможно наблюдать за происходящим издалека, со стороны. И в этом смысле, как мне кажется, главный критерий здесь — это соблюдение журналистом норм, правил поведения, законов и так далее, все остальное становится дополнительным ограничением», — заявил Петров.

Он отметил, что на митингах ряд журналистов попадает в базы данных правоохранительных органов, оказавшись в объективах камер наблюдения. «Вот на эту проблему я отдельно хотел бы обратить внимание: если человек направлен на какую-то уличную акцию по работе для того, чтобы освещать ее, не хотелось бы потом сталкиваться с какими-то последствиями для него. При том, что он не совершал никаких правонарушений, но потом ему придется несколько раз объясняться, почему он оказался в тех или иных списках», — добавил главред ТАСС.

По его мнению, на митинге журналисту достаточно иметь четкое обозначение того, что он отправлен туда по заданию и выполняет свою работу. «Если он не совершает противоправные действия, то ему, по большому счету, не нужны дополнительные QR-коды, что-то еще. Он имеет право там находиться, он не нарушает общественный порядок, этого достаточно», — считает Петров.

Вступивший в силу закон «О внесении изменений в федеральный закон «О собраниях, митингах, демонстрациях, шествиях и пикетированиях» обязывает журналистов, присутствующих на публичных мероприятиях, использовать отличительный знак представителя СМИ. Ранее глава Союза журналистов России Владимир Соловьев сообщил ТАСС, что редакции СМИ будут изготавливать отличительные знаки самостоятельно по единому образцу.

Islet Gene View — инструмент для облегчения исследования островков

Введение

Анализ экспрессии генов обеспечивает связь между генетикой и клеточной функцией и имеет решающее значение для выяснения патофизиологических механизмов. Информация об экспрессии генов в различных тканях сыграла важную роль в научном сообществе. Проект Genotype-Tissue Expression (GTEx) (2013) предоставил новаторский пример того, как делиться информацией от умерших людей. К сожалению, GTEx имеет ограниченную информацию об островках Лангерганса поджелудочной железы человека, поскольку секвенирование было выполнено только на всей поджелудочной железе от ограниченного числа умерших доноров.Важно отметить, что поджелудочная железа должна быть удалена, пока кровоток еще не поврежден, чтобы сохранить функциональность клеток поджелудочной железы, и, следовательно, больше информации об островках поджелудочной железы человека можно получить от доноров органов для целей трансплантации, когда кровоток все еще остается неизменным.

Лаборатория тканей человека (HTL), которая была создана в рамках сотрудничества между университетами Упсалы и Лунда и финансируется за счет гранта на стратегические исследования , т.е. «Совершенство исследований диабета в Швеции» (EXODIAB), создала большое хранилище образцов тканей (островков поджелудочной железы человека, жира, печени и мышц) от умерших доноров органов.Здесь мы использовали экспрессию генов (секвенирование РНК) и данные о генетических вариациях в целом (GWAS) из островков поджелудочной железы человека для выяснения модуляции экспрессии генов в зависимости от статуса T2D, а также для анализа влияния генетических вариаций на экспрессию генов, , т.е. eQTL (количественные признаки выражения). Кроме того, можно исследовать экспрессию генов в зависимости от пола, ИМТ и возраста, а также стимулированной глюкозой секреции инсулина и экспрессии других гормонов поджелудочной железы. Чтобы обеспечить быстрый и надежный обзор данных, а также «поисковые запросы» для ученых в EXODIAB, был создан веб-инструмент Islet Gene View, который будет доступен для научного сообщества.

Материалы и методы

Сбор образцов

Островки поджелудочной железы человека (n = 188), жир (n = 12), печень (n = 12) и мышцы (n = 12) были получены через сеть EXODIAB от Nordic Transplantation Программа (http://www. nordicislets.org). Выделение полной РНК, включая миРНК, проводили с использованием мини-наборов miRNeasy (Qiagen) или AllPrep ДНК / РНК (Qiagen). Качество выделенной РНК контролировали с помощью 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies) или 2200 Tapestation (Agilent Technologies), а количество измеряли с помощью NanoDrop 1000 (NanoDrop Technologies) или Qubit 2.0 Флуорометр (Life Technologies). Клинические характеристики доноров показаны в дополнительной таблице 1.

Дополнительная таблица 1:

Клинические характеристики доноров органов.

Фенотипы островков

Чистоту островков оценивали путем окрашивания дитизоном, а оценки вклада экзокринной и эндокринной ткани оценивали, как описано ранее (Friberg et al., 2011).

Фенотипическая информация :: Диагноз диабета 2 типа (T2D) был основан либо на существующем клиническом диагнозе T2D (N = 33), либо на HbA1c выше 6.5% (единицы NGSP; равно 48 ммоль / моль в IFCC) (N = 25). IGT был определен как HbA1c от 6 до 6,5% (N = 30).

ИМТ и пол были получены из записей доноров. Индекс стимуляции (SI) использовался в качестве меры стимулированной глюкозой секреции инсулина. Для этого островки подвергали статической перфузии глюкозы, которая увеличивалась с 1,67 до 16,7 ммоль / л; инсулин измерялся как при высоком, так и при низком уровне глюкозы. Кратное изменение уровней инсулина между двумя условиями использовалось как измерение секреции инсулина, стимулированной глюкозой.

Подготовка образцов для секвенирования

Один мкг тотальной РНК высокого качества (RIN> 8) использовали для секвенирования с помощью набора для подготовки образцов TruSeq RNA (Illumina). Выбор размера был сделан с помощью гранул Agencourt AMPure XP (Beckman Coulter) с целью получения фрагментов размером более 300 п.н. Качество полученных библиотек контролировали на 2100 Bioanalyzer и 2200 Tapestation (Agilent Technologies) перед объединением 6 образцов в одну проточную ячейку для секвенирования с использованием секвенатора HiSeq 2000 (Illumina).

Анализ данных

Необработанные данные были вызваны базой и демультиплексированы с помощью CASAVA 1.8.2 (Illumina) перед выравниванием по hg38 с помощью STAR версии 2.4.1. Для подсчета количества прочтений, связанных с конкретными транскриптами, использовали featureCounts (v 1.4.4) (Liao et al., 2014) с GENCODE версии 22 в качестве моделей генов, транскриптов и экзонов.

Необработанные данные были нормализованы с использованием усеченного среднего M-значений (TMM) и преобразованы в log ₂ отсчетов на миллион (log ₂ CPM) с использованием voom (Law et al., 2014) перед линейным моделированием. Образцы с общим количеством считываний менее 10 миллионов были исключены из дальнейшего анализа. Кроме того, были исключены гены с уровнем ниже 1 CPM по крайней мере в 10 образцах, оставив 15 017 генов для анализа в 188 образцах. После TMM-нормализации данные были скорректированы с учетом пакетных эффектов с помощью ComBat (борьба с пакетными эффектами при объединении пакетов данных микрочипов) из пакета sva (анализ суррогатных переменных) R (Leek et al., 2012). Эффективная длина каждого гена в каждом образце была рассчитана с использованием RSEM (Li and Dewey, 2011).Полученные значения CPM были преобразованы в значения FPKM путем деления транскриптов на их эффективную длину и умножения на 1000.

Потенциальную связь между экспрессией генов и фенотипами анализировали с помощью линейного моделирования. P-значения были рассчитаны с использованием функции eBayes в limma (Ritchie et al., 2015), а P-значения, скорректированные для множественного тестирования, были рассчитаны для всех генов с использованием поправки Бенджамини-Хохберга (Benjamini and Hochberg, 1995).

Поскольку экспрессия 53% генов в наборе данных коррелировала с чистотой (в основном из-за примеси экзокринной ткани), мы включили чистоту в качестве ковариаты в линейные модели для всех анализов ассоциаций, вместе с полом и возрастом.У шести человек не было диагноза диабета 2 типа, но уровень HbA1c превышал 6,5%. Шесть человек были исключены из анализа дифференциальной экспрессии диабета 2 типа по сравнению с контролем, чтобы избежать потенциального заражения контрольной группы потенциальными недиагностированными случаями диабета.

Эмпирический и консервативный подход был использован для расчета P-значений для корреляций ген-ген. Сначала были рассчитаны корреляции Спирмена между всеми парами ген-ген. Во-вторых, функция fitdistr (подгонка распределений) в пакете MASS (Modern Applied Statistics with S) (Venables and Ripley, 2002) использовалась для оценки среднего и стандартного отклонения этого распределения, что привело к средней корреляции ∼ 0.0142 со стандартной ошибкой ∼0,2631. Эта модель распределения представляет все наблюдаемые корреляции ген-ген в наборе данных с использованием нормального распределения. Для обоих параметров стандартная ошибка аппроксимации была мала (порядок величины = 10 ⁻⁵ ). На основе этих расчетов наблюдаемые данные были использованы для расчета значений Р. Для всех секреторных генов-мишеней P-значения корреляций были рассчитаны с использованием функции pnorm (вероятность нормального распределения) в R (R Core Team, 2016) с использованием оцененных параметров.

В зависимости от отрицательной или положительной корреляции для тестирования использовался нижний или верхний хвост распределения.

В качестве способа исследования биологической значимости данных RNA-Seq и eQTL мы исследовали взаимосвязь между ранее известными вариантами риска и экспрессией генов в Geneview. Для списка из 404 вариантов, ранее связанных либо с риском СД2 (Mahajan et al., 2018), либо с функцией β-клеток, мы идентифицировали все варианты, которые были номинально значимыми eQTL в островках.Для каждого eQTL был извлечен целевой ген. Список генов, на которые влияют eQTL, был протестирован на обогащение генов, экспрессия которых коррелировала с секреторными генами с использованием бутстреппинга. Это было сделано путем многократного выбора случайных наборов генов одинакового размера (10 000 итераций). Затем вычисляли среднее эмпирическое значение P для каждого прогона, которое использовали в качестве нулевого распределения для вычисления вероятности наблюдаемого среднего значения P в наблюдаемом наборе генов.

Результаты

Дифференциально экспрессируемые гены между T2D и недиабетическими донорами

Чтобы изучить глобальную экспрессию генов в островках поджелудочной железы человека, мы выполнили секвенирование РНК на 188 островках от доноров органов с использованием платформы HiSEQ компании Illumina.Среднее количество отсчетов, сопоставленных с генами, составило 26,1 миллиона считываний (± 13,1 миллиона) в диапазоне от 10,0 до 79,4 миллиона. Анализ дифференциально экспрессируемых генов (DEG) между 33 диабетиками и 155 недиабетиками показал, что 2295 из 1406 генов (15%) дифференциально экспрессировались между двумя группами при p <0,05; из них 206 генов (1,4%) достигли общегеномной значимости (FDR <= 0,05, дополнительная таблица 2). Пятью наиболее значимыми DEG, активизирующими T2D, были член семейства E Serpin 2 ( SERPINE2 , рис. 1), йодтиронин дейодиназа 2 ( DIO2 ), индукция дифференцировки синапсов 1 ( SYNDIG1 ), калиевый потенциал-зависимый канал подсемейства A Бета-субъединица 2 ( KCNAB2 ) и член семейства 2 RASD ( RASD2 ).И наоборот, пять наиболее значимых генов с пониженной регуляцией были PLA1A (фосфолипаза A1, член A), Glycine Receptor Alpha 1 ( GLRA1 ), Hedgehog Acyltransferase Like ( HHATL ), Arginase 2 ( ARG2 ). ( РАСГРП1 ).

Дополнительная таблица 2:

Число номинально и общегеномных значимых генов (p ≤ 0,05), связанных с каждым фенотипом, связанным с диабетом. Значения выражены в процентах от общего списка из 14 008 протестированных генов.Значения в скобках представляют собой абсолютное количество генов.

Рисунок 1:

Пример изображения из просмотра гена островка SERPINE2. A: экспрессия гена в жире (F), островках (I), печени (L) и мышцах (M) в одном и том же пуле из 12 человек. B: Экспрессия гена как функция чистоты, определяемая как процент эндокринной ткани. C: Экспрессия выбранного гена по отношению к другим генам в островках. D-H: экспрессия генов по отношению к нескольким фенотипам, связанным с диабетом, то есть диагнозу T2D (рисунок 1D), слою HbA1c (1E), непрерывному HbA1c (1F), ИМТ (1G) и стимулирующему индексу (1H).Сообщается статистика теста, а именно: коэффициент детерминации (R2), номинальное значение P и процентное ранжирование среди всех генов, рассчитанное на основе отсортированных значений P. I-M: экспрессия генов по отношению к секреторным генам INS (рисунок 1I), GCG (1J), SST (1K), PPY (1L) и IAPP (1M). Приводятся значения ρ (r) Спирмена и P-значение гена на основе эмпирического корреляционного распределения. INS = инсулин, GCG = глюкагон, SST = соматостатин, PPY = панкреатический полипептид, IAPP = островковый амилоидный полипептид.

Затем мы стратифицировали наш анализ на основе уровней Hba1c, при этом Hba1c> 6,5 считался СД2, Hba1c между 6% и 6,5% считался имеющим IGT, а HbA1c <6 нормальной толерантностью к глюкозе (NGT). Из общего числа 15017 генов 12% были номинально (P <= 0,05) значимо DEG между IGT и NGT; однако эти различия не достигли общегеномной значимости (FDR <= 0,05). Точно так же 11,5% генов были номинально дифференциально экспрессированы (P <= 0,05) и, в частности, только 0.4% (55 генов, дополнительная таблица 3) были общегеномными DEGS между донорами T2D и NGT (нормогликемическими), когда диагноз был поставлен на основании только одного уровня Hba1c. Анализ ассоциации экспрессии генов с использованием HbA1c в качестве непрерывной переменной выявил экспрессию 5,1% генов, номинально связанных с HbA1c; только 0,1% (21 ген, дополнительная таблица 4) были значимыми для всего генома.

Дополнительная таблица 3:

Гены со значимой для всего генома (FDR <= 0,05) ассоциацией с> 6,5% по сравнению со стратами <6% HbA1c.

Дополнительная таблица 4:

Гены с общегеномной (FDR <= 0,05) корреляцией с HbA1c.

Из 1619 генов, которые, как было установлено, номинально значимо связаны с уровнями HbA1c в предыдущем исследовании, основанном на подмножестве того же набора данных (см. Fadista et. Al.), 36,5% были воспроизведены в этом более крупном наборе данных, поскольку номинально дифференциально экспрессировались в либо слой T2D, либо слой IGT.

Коэкспрессия генов с экспрессией секреторных генов островков

Островки поджелудочной железы включают различные типы клеток, определяемые белками, которые они секретируют; альфа-клетки секретируют глюкагон, бета-клетки секретируют инсулин и островковый амилоидный полипептид ( IAPP) , дельта-клетки секретируют соматостатин, а F-клетки (также называемые PP-клетками) секретируют панкреатический полипептид Y.Поэтому мы также выполнили анализ коэкспрессии всех генов с этими 5 секреторными генами, включая инсулин ( INS , рис. 1I), глюкагон ( GCG , рис. 1J), соматостатин ( SST , рис. 1K), островковый амилоид. полипептид ( IAPP , фигура 1L) и панкреатический полипептид Y ( PPY , фигура 1M). Экспрессия

INS коррелировала с наибольшим количеством генов, экспрессируемых в островках поджелудочной железы человека (дополнительная таблица 5), за которыми следовали GCG, SST, IAPP и PPY соответственно.Примечательно, что 581 ген показал положительную коэкспрессию с INS , 343 с GCG , 98 с SST и 50 с IAPP (рис. 2A), тогда как 632 гена отрицательно коэкспрессировались с INS , 298 с GCG , 92 с SST и 12 с IAPP (рисунок 2B). 112 генов были либо положительно, либо отрицательно коэкспрессированы с двумя или более секреторными генами (рис. 2C-D). Шесть генов показали противоположную корреляцию с INS, и GCG, т.е.грамм. WIZ, NUDC, IMP4, ZNF787, KLHL21 и ISG20 . 10 основных коррелированных генов показаны в дополнительной таблице 6.

Дополнительная таблица 5:

Число генов, положительно или отрицательно коэкспрессированных с 6 различными генами, кодирующими секретируемые гормоны поджелудочной железы.

Дополнительная таблица 6:

Лучшие отрицательно и положительно коррелированные гены для секреторных генов. Гены с номинально значимыми ассоциациями (p ≤ 0,05) выделены жирным шрифтом.

Рисунок 2:

Диаграмма Венна генов, коэкспрессируемых вместе с секреторными генами.A: Перекрытие положительно коэкспрессируемых генов (ρ ≥ 0, P ≤ 0,05) с инсулином (INS), глюкагоном (GCG), соматостатином (SST) и островковым амилоидным полипептидом (IAPP). B: перекрытие отрицательно коэкспрессированных генов (ρ ≤ 0, P ≤ 0,05). C: перекрытие всех коэкспрессируемых генов независимо от направления (P ≤ 0,05). D: перекрывающиеся гены, в которых коэкспрессия отрицательна для одного секреторного гена и положительна для другого (или наоборот).

INS наиболее сильно коррелировал с геном связывающего белка 1 фактора регуляции интерферона 2 (IRF2BP1) (r = 0.85, p = 0,002), но отрицательно с геном GC-Rich Promoter Binding Protein 1 Like 1 ( GPBP1L1) (r = -0,72, P = 0,0053). Глюкагон ( GCG ) показал сильную положительную корреляцию с геном кандидата-супрессора опухоли 3 ( TUSC3 ) и отрицательную с анкириновым повтором и доменом BTB, содержащим 2 ( ABTB2 ). Экспрессия гена ретинол-связывающего протеина 4 ( RBP4 ) показала наиболее сильную положительную корреляцию с экспрессией гена SST .Кроме того, RBP4 отрицательно связан с HbA1c (P = 0,0085) и BMI (P = 0,023), но положительно коррелирует с экспрессией INS (P = 0,048). Ген WWC показал наиболее сильную отрицательную корреляцию с SST. WWC2 также отрицательно ассоциировался с чистотой (P = 1,8 · 10 ⁻¹⁵ ) и отрицательно коррелировал с экспрессией INS (P = 0,021), предполагая, что он также может иметь экзокринное происхождение.

Количественные признаки экспрессии (eQTL)

Чтобы изучить влияние генетической изменчивости на экспрессию генов в островках поджелудочной железы человека, мы выполнили анализ eQTL с использованием данных GWAS, рассчитанных с помощью панели сравнения интегрированного набора вариантов 1000 Genomes Phase I (март 2012 г. ) и данные РНК от 188 доноров.Влияние SNP, ближайших к данному гену, на его экспрессию рассчитывали с помощью анализа cis-eQTL с использованием Matrix eQTL. Для этого анализа учитывались только цис-eQTL, расположенные в пределах 2 Мб от целевых генов. 13 296 (95%) всех генов имели хотя бы один номинально значимый eQTL (P <0,05), а 25% имели хотя бы один значимый для всего генома eQTL (FDR <= 0,05), скорректированный для всех тестируемых вариантов. Пять самых сильных eQTL были обнаружены в генах ERAP2, ERV3-1, XRRA1, XKR9 и ASAh3 (дополнительный рисунок 1).Среди 80 ведущих DEG по всем фенотипам 58 имели по крайней мере один значимый для всего генома eQTL (FDR <= 0,05). Среди всех изученных генов 3494 гена (23,2%) имели хотя бы один значимый для всего генома eQTL, а 13993 (93,2%) имели хотя бы один номинально значимый eQTL.

Дополнительный рисунок 1:

Манхэттенский график eQTL с наименьшим значением P на ген. Лучшие 5 eQTL помечены своим целевым геном.

Интеграция экспрессии генов в островках с вариантами риска СД2

Предыдущие исследования GWAS сообщили о 404 уникальных вариантах, связанных с риском СД2 (Mahajan et al., 2018). Эти 404 SNP привели к списку из 383 целевых eGenes (генов, на экспрессию которых влияют генетические варианты), 41 из которых был специфически связан с общей функцией β-клеток. Чтобы дополнительно выяснить роль этих генов в T2D, мы показали с помощью анализа обогащения и начальной загрузки этих 383 eGenes, обогащение было значительным для коэкспрессии с INS , но не с экспрессией GCG или SST (рисунок 3A). Для списка генов, связанных с β-клетками, обогащение было значительным как для INS, так и для GCG.Гены, которые были значительно положительно коэкспрессированы с INS или SST (эмпирический P <= 0,05), имели тенденцию к усиленной регуляции при T2D (рис. 3B), и наоборот, отрицательно коэкспрессируемые гены подавлялись при T2D. GCG показал противоположную картину; гены, позитивно коэкспрессированные с GCG , подавлялись при T2D и наоборот.

Рисунок 3:

(A) Распределение генов, экспрессия которых коррелирует с INS, GCG и SST для всех генов (вверху) и генов, связанных с функцией бета-клеток (внизу).(B) ЭГены T2D и их ассоциация с экспрессией INS, GCG и SST

Было обнаружено, что четыре гена являются как номинально значимыми эГенами в островках, так и подавленными в T2D — CYB561, PKIG, PEX16, CKB и PTGDS . Точно так же 3 гена были eGenes в островках и подавлялись в T2D — GPRC5D-AS1, PARP14 и SNAP23 .

Чтобы функционально аннотировать все гены, экспрессируемые в островках поджелудочной железы человека, мы создали веб-инструмент Islet Gene View (IGW) (см. Ниже).

Islet Gene View (IGW) — функции

Islet Gene View (IGW) будет доступен на веб-странице после процесса бесплатной регистрации. IGW использует несколько общих идентификаторов генов (, например, символ гена , идентификатор гена Ensembl и полное название гена) и предоставляет графики экспрессии генов по отношению к фенотипам островков и экспрессии других генов. Экспрессия генов может быть связана с фенотипами, связанными с диабетом, такими как возраст, ИМТ и диагноз СД2, а также с толерантностью к глюкозе, определяемой слоями HbA1c (нормальная толерантность к глюкозе, NGT: HbA1c <6%, нарушение толерантности к глюкозе, IGT: HbA1c между 6-6.5% и T2D: HbA1c> 6,5%). Представляет интерес также совместная экспрессия других клеточно-специфических генов, таких как инсулин ( INS) , глюкагон ( GCG) и островковый амилоидный полипептид ( IAPP) . Идентификатор гена Ensembl является идентификатором первичного ключа для базы данных экспрессии, а дополнительные идентификаторы генов и другие аннотации были получены из Ensembl с использованием API biomaRt (Durinck et al., 2009). Помимо данных об экспрессии островковых генов, для сравнения экспрессии генов в различных тканях используется панель из 12 донорских тканей, состоящая из биопсий жира, островков, печени и скелетных мышц.10 основных генов, ассоциированных с островковыми фенотипами, показаны в дополнительной таблице 7.

Дополнительная таблица 7:

Топ-10 генов, положительно и отрицательно связанных с каждым изучаемым фенотипом, отсортированы по значению Р.

В качестве примера мы здесь показываем один из генов, которые, как было установлено, оба являются eGene, нацеленными на вариант риска T2D, а также имеют дифференциальную активацию при T2D по сравнению с NGT ( PTGDS, SNAP23 и KCNQ1 ).

PTGDS

В интегративном анализе SNP риска диабета, PTGDS (дополнительный рисунок 2) оказался самым популярным, поскольку он наиболее тесно связан с T2D, а также коэкспрессируется с INS и нацелен на SNP риска диабета. eQTL.В Geneview он также номинально связан с BMI и HbA1c и имеет значимый для всего генома сигнал eQTL от двух связанных локусов (rs28592848 и rs28375538).

Дополнительный рисунок 2:

Островной ген Просмотр изображения PTGDS.

SNAP23

SNAP23 (дополнительный рисунок 3) — еще один лучший результат интегративного анализа SNP риска диабета. В отличие от PTGDS, этот ген номинально подавляется при T2D (а также у пациентов с HbA1c> = 6,5%) и отрицательно коэкспрессируется с INS.Кроме того, он отрицательно коэкспрессировался с геном SST и отрицательно ассоциировался с чистотой, что, возможно, предполагало более высокую экспрессию в экзокринной поджелудочной железе.

Дополнительный рисунок 3:

Islet Gene Просмотр изображения SNAP23

Чтобы дополнительно продемонстрировать полезность IGW, мы сгенерировали выходы IGW для нескольких генов, ранее участвовавших в моногенном или полигенном диабете.

KCNQ1

Экспрессия KCNQ1 сильно отрицательно коррелировала с чистотой, что позволяет предположить, что он также обогащен экзокринной частью поджелудочной железы (дополнительный рисунок 4).Он был значительно снижен у пациентов с HbA1c> = 6,5%, но не у пациентов с диагностированным СД2. Кроме того, он отрицательно коэкспрессируется с геном INS (p = 0,048). Кроме того, на экспрессию KCNQ1 также номинально влияет rs8181588, ранее установленный SNP риска T2D, расположенный в интроне KCNQ1 .

Дополнительная фигура 4: Изображение

островкового гена KCNQ1

MNX1

MNX1 (дополнительная фигура 5) высоко экспрессируется в островках, но не в жире, печени или скелетных мышцах.Он также положительно коррелировал с чистотой и экспрессией INS, предполагая, что это бета-специфический ген.

Дополнительная фигура 5: Изображение гена островка

Просмотр MNX1

PDX1

PDX1 был высоко экспрессирован в островках и положительно коррелировал с чистотой островков и значимо ассоциировался со стимулирующим индексом (P = 0,037), а также чистотой (дополнительный Рисунок 6). Кроме того, он был номинально подавлен при СД2 (P = 0,022) и показал сильную корреляцию с HbA1c и ИМТ.

Дополнительный рисунок 6: Изображение островкового гена

PDX1

WFS1

WFS1 (дополнительный рисунок 7) положительно коррелировал с чистотой и номинально повышал IGT, но не у пациентов с СД2. Кроме того, это положительно коррелировало с экспрессией INS и SST .

Дополнительный рисунок 7:

Islet Gene Изображение WFS1

Было обнаружено, что все шесть генов имеют по крайней мере один номинально значимый eQTL с наименьшими значениями P для 6.3e-04 ( PDX1 ), 9.8e-04 ( WFS1 ), 1.2e-03 ( KCNQ1 ), 1.8e-03 ( SNAP23 ) и 3.2e-03 ( MNX1 ).

Пример

CHL1, ранее связанного с T2D

Мы также предоставляем график IGW для гена CHL1 (дополнительный рисунок 8), который, как ранее было показано, связан с T2D (Belongie et al., 2017 ) .. Кроме того, в соответствии с предыдущим исследованием нашей лаборатории (Fadista et al. 2014) экспрессия гена CHL1 была подавлена ​​в островках T2D из этого большего набора данных (дополнительный рисунок 2).Более того, было обнаружено, что связанный с инсулином натощак SNP rs9841287 в локусе CHL1 является eQTL для генов CHL1 и CHL1-AS1 (P = 0,028, возрастающий аллель = G). В подтверждение вышеприведенных выводов, это также отрицательно было связано с высоким HbA1c.

Дополнительная фигура 8:

Islet Gene Просмотр изображения близкого гомолога L1 (CHL1), гена с предыдущими ассоциациями с признаками, связанными с диабетом, такими как HbA1c и секреция инсулина.

Экспрессия гена

SERPINE2 показала наибольшее различие между T2D и NGT.

Ген Serpin Family E Member 2 ( SERPINE2 ) был выбран из-за сильной связи его экспрессии с T2D.Помимо высокой экспрессии в островках, он также экспрессируется в жировой ткани, печени и мышцах (рисунок 1A). SERPINE2 также умеренно коррелировал с чистотой (r2 = 0,064, p = 0,011, рисунок 1B).

Экспрессия гена SERPINE2 в островках была выше, чем, например, хорошо известный ген β-клеток, ген J Member 11 подсемейства калиевых напряженно-управляемых каналов ( KCNJ11 , ранг 40,3%). Наиболее высокоэкспрессируемым геном в наборе данных был ген глюкагона ( GCG) , за которым следуют ген Regenerating Family Member 1α ( REG1A) и ген митохондриально кодируемой цитохром С оксидазы I ( MT-CO1) . Ген SERPINE2 был наиболее сильно активирован при T2D по сравнению с NGT (PFDR = 1,1 · 10 ^-5 , log ₂ -кратное изменение = 0,58 или ~ 150% увеличение, рис. 1D). Экспрессия SERPINE2 показала из всех генов самую сильную корреляцию с HbA1c (r2 = 0,13, Pfdr = 9,5 × 10-7).

дюйма (рисунок 1F). Наиболее подавленным геном в T2D по сравнению с NGT был ген фосфолипазы A1 Member A ( PLA1A ) (log ₂ -кратное изменение = -1,00, PFDR = 5,9 · 10 ^-5 ).

Ген 2 члена 2 семейства Solute Carrier ( SLC2A2 ) (дополнительный рисунок 9), кодирующий транспортер глюкозы 2 (GLUT2), показал наиболее сильную отрицательную корреляцию с HbA1c. В поддержку этого SLC2A2 экспрессия была также ниже в островках от T2D по сравнению с донорами NGT (PFDR = 3,2 · 10 ^-4 , log ₂ -кратное изменение = -1,08) (Рисунок 1G).

Дополнительный рисунок 9:

Островной ген Просмотр изображения SLC2A2.

Обсуждение

Islet GeneView (IGW) направлено на предоставление информации об экспрессии генов островков человека в сочетании с фенотипами, связанными с диабетом, в островках людей с СД2 и без него.Таким образом, Islet Gene View дополняет другие связанные базы данных, такие как Islet eQTL explorer (Varshney et al., 2017), который связывает генетические вариации с экспрессией островковых генов и состоянием хроматина в 112 образцах, и GTEx (2013), который всесторонне характеризует транскриптом человека во многих тканях, в том числе в некоторых образцах цельной поджелудочной железы. Однако GTEx не предоставляет данных об островковом транскриптоме, который явно сильно отличается от экзокринной части поджелудочной железы.

По сравнению с предыдущими публикациями по тому же набору данных (Fadista et al., 2014; Taneera et al., 2012), текущий набор данных включал 188 островков от доноров человеческих органов, по сравнению с нашим предыдущим отчетом (Fadista et al., 2014) , в аналитический конвейер внесено несколько улучшений. Мы ввели пакетную коррекцию с помощью ComBat. Кроме того, мы усовершенствовали методологию расчета P-значений корреляции с более высокой специфичностью и строгостью при обнаружении потенциальных корреляций ген-ген, которые теперь меньше зависят от групповых эффектов.Это снижает влияние неспецифических межгенных корреляций, возникающих в результате процедуры нормализации экспрессии генов. Все корреляции ген-ген были предварительно рассчитаны, чтобы оценить нулевое распределение значений корреляции. Это требует больших вычислительных ресурсов, но это нужно сделать только один раз.

В этом новом расширенном наборе данных мы определили в общей сложности 215 генов, которые показали t по всему геному (FDR <= 0,05), и 6157 генов, которые показали номинальную значимость (P <= 0,05) при сравнении T2D с NGT).Для стратифицированного фенотипа HbA1c (T2D, IGT и NGT) 1789 генов были номинальными DEG между гликемическими кластерами T2D, IGT и NGT по сравнению с 1619 генами в предыдущем анализе (Fadista et al., 2014).

T2D был приписан неспособности бета-клеток поджелудочной железы производить достаточное количество инсулина для удовлетворения потребностей из-за повышенной инсулинорезистентности, поэтому островки человека являются ключевой тканью в патогенезе T2D. Полногеномные исследования ассоциации выявили связь 403 генетических локусов с риском СД2, тогда как их функция в значительной степени неизвестна.Чтобы в дальнейшем использовать эти данные для выяснения функции ранее сообщенных локусов T2D, мы сопоставили данные с экспрессией генов и данными eQTL в IGW, чтобы идентифицировать гены, экспрессия которых модулируется локусами риска T2D, и дополнительно выяснить их связь с признаками островков. Здесь мы идентифицировали множественные локусы генов, которые транскрипционно регулируются локусами риска T2D, которые также дифференциально экспрессировались у пациентов с диабетом 2 типа и коррелировали с секрецией INS (Рисунок 3). Два примера этих генов, PTGDS и SNAP23, более подробно описаны ниже.В целом это демонстрирует, как IGW можно использовать для выявления сложных взаимосвязей между генетикой, транскриптомикой и диабетическими фенотипами.

Ген PTGDS (дополнительный рисунок 3) кодирует фермент, который превращает простагландин h3 в простагландин D2. В свою очередь, было обнаружено, что высокие уровни PGD2 увеличивают чувствительность к инсулину (Fujitani et al., 2010), а отключение PTGDS дает обратный эффект, приводящий к инсулинорезистентности, нефропатии и атеросклерозу за счет воздействия на жировую ткань (Ragolia et al., 2005). Хотя в предыдущей научной литературе мы обнаружили мало данных о корреляции между диабетом и PTGDS в островковых клетках, наши результаты предполагают, что экспрессия гена в островках коррелирует как со статусом диабета, ИМТ, так и экспрессией INS, что указывает на то, что PTGDS функционирует. и уровни простагландина могут быть связаны с секрецией инсулина, а также с периферической резистентностью к инсулину.

Белковый продукт SNAP23 (дополнительный рисунок 4) участвует в слиянии везикул и необходим для периферической чувствительности к инсулину посредством транспортировки GLUT4 (Kawanishi et al., 2000). Роль обратная в островках, где специфический для эндокринных островков нокаут SNAP23 у мышей показывает улучшенную толерантность к глюкозе и секрецию инсулина (Kunii et al., 2016). Наши результаты коррелируют с этими предыдущими открытиями в островках несколькими способами — SNAP23 номинально значительно подавляется у диабетиков, отрицательно коррелирует с экспрессией INS и, что интересно, также отрицательно коррелирует с экспрессией соматостатина, о которой ранее не сообщалось.

Затем мы исследовали гены, ранее участвовавшие как в моногенном, так и в полигенном диабете, с использованием IGW. Мутации моногенного диабета нацелены на гены, которые необходимы для достаточной секреции инсулина, тогда как гены полигенного диабета более разнообразны по своим функциям.

KCNQ1 (дополнительный рисунок 5) — это потенциал-зависимый калиевый канал, который влияет на реполяризацию мембраны островковых клеток. Более ранние исследования показывают, что избыточная экспрессия KCNQ1 отрицательно влияет на секрецию инсулина за счет преждевременной реполяризации (Kasuga, 2011).Наши новые данные также показывают отрицательную корреляцию с выражением INS. Объяснение этих несколько несопоставимых результатов неясно, но может включать компенсаторную реакцию бета-клеток, чтобы замедлить реполяризацию.

PDX1 (дополнительный рисунок 6) кодирует другой фактор транскрипции, который необходим для созревания и поддержания бета-клеток (Spaeth et al., 2017). Мы здесь добавляем новую информацию, показывающую, что PDX1 подавляется при T2D, подтверждая предыдущие данные о том, что его экспрессия коррелирует с хронической гипергликемией (Fujimoto and Polonsky, 2009).

Ген WFS1 (дополнительный рисунок 7) продуцирует белок вольфрамин. Инактивация WFS1 дополнительно увеличивает стресс ER за счет вольфрамина, что приводит к прогрессирующей гибели бета-клеток (Fonseca et al., 2005). Это также показано в Geneview, где WFS1 показывает четкую положительную корреляцию с экспрессией INS . Интересно, что соматостатин также значительно коррелирует с WFS1 .

Несколько удивительно, что индекс стимуляции (SI) не показал значимой корреляции в масштабе всего генома с экспрессией какого-либо гена.Этому может быть несколько объяснений. Во-первых, хотя это самый большой набор данных в своем роде, у нас все еще есть ограниченные возможности для получения общегеномной значимости для такой грубой меры, как SI. Несмотря на это, информация может быть полезной в качестве разведочной.

IGW предоставляет информацию о совместной экспрессии генов с секреторными генами из α-клеток, β-клеток, d-клеток, ε-клеток и PP-клеток. IRF2BP1 , корепрессор фактора регуляции интерферона 2 ( IRF2 ) (Mashima et al., 2011), показали наиболее сильную положительную корреляцию с INS. IRF2 представляет собой фактор транскрипции, который подавляет экспрессию интерферона α и β, что может влиять на выживаемость и пролиферацию островковых клеток. Интересно, что IRF2 отрицательно коррелирует с экспрессией INS в этом наборе данных

GC-богатый промотор связывающий белок 1 like 1 ген ( GPBP1L1 ) показал самую сильную отрицательную корреляцию с экспрессией INS. Хотя функция GPBP1L1 неизвестна, он, вероятно, действует как фактор транскрипции, как и его паралогичный ген GPBP1 (Hsu et al., 2003). Это может указывать на то, что экспрессия GPBP1L1 подавляется экспрессией INS или секрецией инсулина или подавляется в бета-клетках, продуцирующих INS.

Наблюдалась двунаправленная экспрессия нескольких генов с INS и GCG (рис. 2). Интересно, что экспрессия 6 генов положительно коррелировала с экспрессией INS и отрицательно с экспрессией GCG, например WIZ, NUDC, IMP4, ZNF787, KLHL21 и ISG20 . Из них ген Widely Interspaced Zinc Finger Motifs ( WIZ) является частью комплекса G9a / GLP, участвующего в метилировании h4K9 сайтов связывания CTCF, что приводит к подавлению экспрессии генов.(Исбель и др.). Следовательно, комплекс G9a / GLP может действовать как переключатель, который регулирует баланс между секрецией инсулина и глюкагона и, как было показано, влияет на передачу сигналов инсулина в печени (Xue et al., 2018). NUDC и KLHL21 играют важную роль в делении клеток и, возможно, могут влиять на массу конкретной популяции клеток. IMP4 влияет на процессинг пре-рРНК и, таким образом, на продукцию рибосом. ISG20 — это экзорибонуклеаза, которая стимулируется интерферонами, а ZNF787 — ген с неизвестной функцией.

SLC2A2 , кодирующий транспортер глюкозы GLUT2 играет ключевую роль в функции островков (Thorens, 2015). Его экспрессия подавлялась уже у пациентов с IGT и тем более у пациентов с T2D. Общие варианты в SLC2A2 связаны с T2D, глюкозой натощак и HbA1c, а также с секрецией инсулина в предыдущих GWAS (Manning et al., 2012; Scott et al., 2017). Подавление SLC2A2 может быть эпигенетически опосредовано, поскольку было показано, что он метилирован в островках пациентов с СД2 (Волков и др., 2017). Общие варианты в SLC2A2 также связаны с ответом на метформин (Zhou et al., 2016).

SNP rs9841287 в гене CHL1 ранее был связан с концентрациями инсулина натощак, при этом аллель A (частота = 0,69 в 1000 геномов) увеличивал уровни инсулина i (P = 7,78 · 10 ⁻⁹ ) (Manning et al. al., 2012; Scott et al., 2017)). Данные IGW предполагают, что высокая экспрессия CHL1 в островках может иметь положительное влияние на функцию бета-клеток.

Важным аспектом Islet Gene View является то, что он может сравнивать экспрессию различных генов в виде простых гистограмм. Наиболее высоко экспрессируемыми генами в островках были GCG , за которыми следовали REG1A, MT-CO1 и MT-ATP6 . Хотя сравнимость между генами выше при РНК-секвенировании, чем при использовании микрочипов, последовательность гена может влиять на скорость секвенирования различных транскриптов. Информация о чистоте позволяет частично разделить паттерны экспрессии в эндокринной и экзокринной тканях.

В совокупности Islet Gene View — это инструмент, облегчающий исследования островков поджелудочной железы человека и, следовательно, доступный для всего научного сообщества. Однако мы должны помнить, что у него есть ограничения, он основан на относительно небольшом размере выборки островков от пациентов, набранных через отделения интенсивной терапии. Данные являются наблюдательными, но не могут отличить корреляцию от причинно-следственной связи. Однако исследовательское использование IGW может помочь в разработке более всеобъемлющих функциональных последующих исследований.

Профили экспрессии островков поджелудочной железы у склонных к диабету мышей C57BLKS / J выявляют транскрипционные различия, вносимые локусами DBA, включая Plagl1 и Nnt | Патогенетика

A_51_P417251	6330403K07RIK	КДНК RIKEN	4.32	17,43	11	71,1	DBA
A_52_P532456	PLAGL1	геноподобная плейоморфная аденома 1	2.93	7,15	10	12,8	DBA
A_51_P113395	NNT	никотинамиднуклеотидтрансгидрогеназа	1.94	4,22	13	116,6	DBA
A_52_P395228	NNT	никотинамиднуклеотидтрансгидрогеназа	2.01	4,07	13	116,6	DBA
A_51_P113399	NNT	никотинамиднуклеотидтрансгидрогеназа	1.79	3,85	13	116,6	DBA
A_51_P422030	FLJ22709	гипотетический белок	1.99	3,82	8	69,8	DBA
A_51_P358765	СПП1	секретируемый фосфопротеин 1	2.46	3,76	5	103,6	B6
A_51_P253984	PCP4	Белок клеток Пуркинье 4	1.93	3,52	16	96,9	DBA
A_51_P402943	S100A9	S100 кальций-связывающий белок A9	1.21 год	3,28	3	90,8	DBA
A_52_P542860	BTBD9	BTB-домен, содержащий 9	1.99	3,27	17	28,7	DBA
A_51_P440682	CAP1	CAP, аденилатциклаза-ассоциированный белок 1	1.82	3,17	4	122,3	DBA
A_52_P3029	AGPAT4	1-ацилглицерин-3-фосфат-O-ацилтрансфераза 4	1.42	2,92	17	10.9	DBA
A_51_P323620	THYN1	ядерный белок тимоцитов 1	1.74	2,91	9	26,9	Другие
A_51_P346165	AGPAT4	1-ацилглицерин-3-фосфат-O-ацилтрансфераза 4	1.42	2,89	17	10.9	DBA
A_51_P118417	SCPEP1	серинкарбоксипептидаза 1	1.70	2,87	11	89,0	DBA
A_51_P454873	NPY	нейропептид Y	1.97	2,72	6	49,8	B6
A_51_P4	ГНПТГ	N-ацетилглюкозамин-1-фосфаттрансфераза, гамма-субъединица	1.82	2,71	17	23,4	DBA
A_52_P748882	ENO2	энолаза 2	1.62	2,58	6	124,8	DBA
A_51_P167535	FABP3	белок, связывающий жирные кислоты 3	1.88	2,53	4	129,8	DBA?
A_51_P130028	ENO2	энолаза 2	1.63	2,53	6	124,8	DBA
A_51_P101545	HGFAC	Активатор HGF	-1.92	-2,54	5	34,1	DBA
A_51_P337269	АЛДОБ	альдолаза B, фруктозобисфосфат	-1.17	-2,66	4	49,6	B6
A_51_P215627	PLAC9	специфичные для плаценты 9	-1.89	-2,67	14	23,6	DBA
A_52_P644774	ZZEF1	цинковый палец, тип ZZ с EF-доменом 1	-1.92	-2,73	11	73,0	DBA
A_51_P517075	SERPINF1	ингибитор серпин-пептидазы, член 1 клады F	-1.50	-2,78	11	75,5	DBA
A_52_P213889	TMC7	трансмембранный каналоподобный 7	-1.87	-2,83	7	114,5	DBA
A_52_P613498	4833420G17RIK	КДНК RIKEN	-2.04	-3,01	13	116,7	DBA
A_51_P376656	SYNPR	синаптопорин	-2.13	-3,08	14	11,4	DBA
A_52_P50496	HLA-A	главный комплекс гистосовместимости, класс I, A	-2.23	-3,16	17	32,1	DBA
A_51_P509961	SLC5A10	семья носителей растворенного вещества 5 член 10	-1.21 год	-3,24	11	61,8	DBA
A_51_P246677	REC8L1	REC8-как 1	-2.28 год	-3,61	14	50,5	DBA
A_51_P392518	THUMPD1	THUMP-домен, содержащий 1	-2.83	-4,30	7	115,6	DBA
A_51_P146560	MSLN	мезотелин	-2.31 год	-4,36	17	23,9	DBA
A_52_P137500	AK046255	Неизвестная кДНК	-2.70	-5,06	Икс	131,8	DBA
A_51_P443443	5830417I10RIK	КДНК RIKEN	-2.75	-5,46	3	89,0	DBA
A_52_P231729	h3-Q1	главный комплекс гистосовместимости Q1b	-8.74	-29,31	17	33,4	DBA

Набор для лечения сахарного диабета у собак Ликарда

Джозеф Харви

Собачий диабет становится все более актуальной проблемой в США.Имея это в виду, Animal Pharm встретила стартап из Канзас-Сити, разрабатывающий регенеративное лекарство для лечения диабета у собак. Старший репортер Джозеф Харви рассказал Ликарде о жизнеспособности трансплантации островков как лекарства от собачьего диабета.

Отбор новых лекарств от диабета традиционно проводится с использованием плоских монослоев инсулин-продуцирующих клеток организма. Однако этот процесс затрудняет прогнозирование того, как полученные лекарства будут реагировать внутри тела пациента.

Likarda работает над решением этой проблемы, уделяя особое внимание лечению диабета у собак.Компания разработала трехмерные кластеры островковых клеток, получившие название Kanslets — дань уважения родному штату Канзас. Эти канслеты можно использовать для скрининга новых лекарств для лечения диабета, но они также могут быть использованы в качестве терапевтического лечения заболевания.

В 2000 году трансплантация островков была разработана как средство лечения сахарного диабета 1 типа у людей. По мере роста популярности процедуры в США было открыто 32 участка трансплантации островков. Однако это число снизилось до 14 из-за отсутствия донорской ткани для островков — для одного реципиента часто требуется 2-3 донора.Лечение диабета человека островковыми клетками прогрессирует. Однако недостатком было ограниченное количество островков.

Изучая разработку этого средства для лечения собак и кошек, Лиза Стехно-Биттель, президент и соучредитель Likarda, и ее команда приступили к созданию лучшего островка. Конечным продуктом стал Канслет — небольшой островок с органической инженерией, который можно эффективно производить в больших масштабах.

Сахарный диабет домашних животных

Одна из 160 собак или кошек в США страдает диабетом.По оценкам Ликарды, количество собак и кошек с диабетом в США увеличилось в три раза за последние 30 лет. В США около 195 000 собак страдают диабетом и 216 000 кошек больны этим заболеванием.

Стандарт лечения диабета у большинства домашних животных — две инъекции в день инсулина, предназначенного для людей. Это неудобный, трудоемкий и напряженный процесс. Доктор Стехно-Биттель сказал, что трудно сопоставить уровень инсулина с уровнем глюкозы в крови животного.

В феврале 2013 года исследовательская группа Автономного университета Барселоны (UAB) в Испании заявила, что первой из них вылечила диабет 1 типа у собак экспериментальным путем.Исследовательская группа использовала один сеанс генной терапии, чтобы вылечить болезнь. Исследование показывает, что за некоторыми собаками наблюдали более четырех лет без повторения симптомов.

Минимально инвазивное лечение состоит из одного сеанса различных инъекций в задние лапы животного с помощью игл, которые обычно используются в косметических процедурах. Эти инъекции вводят векторы для генной терапии, предназначенные для экспрессии гена инсулина и глюкокиназы, которая является ферментом, регулирующим поглощение глюкозы из крови.

Однако, по словам Ликарда, хотя исследования в области генной терапии интересны, это еще не жизнеспособное лечение. Фирма сообщила Animal Pharm, что испанские исследования имеют большой потенциал, но остается не уверенным, насколько далеко они продвинут возможности лечения диабета у домашних животных.

Доктор Стехно-Биттель объяснил, что диабет уже много раз излечивался на экспериментальных моделях животных с диабетом. Некоторые из этих успешных методов лечения превратились в эффективные лекарства для домашних животных или людей. «Так что, хотя это исследование очень захватывающее, те из нас, кто работает в этой области, были в восторге от научных открытий, а позже были разочарованы», — добавила она.

Картик Рамачандран, вице-президент и соучредитель фирмы, сказал, что коммерциализация продукта Likarda не за горами. Он сказал, что до начала полных клинических исследований на собаках осталось всего несколько месяцев.

Путь к успеху

На сегодняшний день канслеты Ликарды использовались для лечения диабета у крыс. По словам доктора Стехно-Биттел, лечение Ликарда позволило избежать потенциальных ловушек, которые могут помешать имплантационному лечению: имеется достаточный запас донорской ткани; канслеты можно безопасно хранить; процедура имплантации достаточно неинвазивна; и никакой иммуносупрессии не требуется.

Компания сначала будет стремиться коммерциализировать свою терапию для собак, а затем и продукт для кошек. В более долгосрочной перспективе Likarda может внедрить свою технологическую платформу для лечения травм костей и хрящей, дефицита тканей и желудочно-кишечного тракта.

Создание бизнеса

Работа Ликарда разделена на два сегмента. Во-первых, компания использует свои ноу-хау в области клеточного кластера, чтобы действовать как контрактная исследовательская организация под названием LikardaBio. Эта работа включает вторичный скрининг лекарств для тестирования соединений, предназначенных для диабетических рынков, и первичный скрининг соединений с помощью органотипических видоспецифичных скринингов на такие заболевания, как рак.

Д-р Рамачандран объяснил: «Наш бизнес по CRO финансирует часть нашей работы по лечению диабета. Остальное финансируют учредители ». Он объяснил клиентам компании диапазон ее работы по CRO — от крупных фармацевтических производителей до быстрорастущих стартапов.

Вторая сторона бизнеса — разработка лекарства от диабета для домашних животных. Этот сегмент фирмы называется Likarda Animal Health. Д-р Рамачандран сказал, что компания получит финансирование до конца 2013 года и в настоящее время стремится к установлению коммерческих партнерских отношений.

(PDF) Трансплантация инкапсулированных островков: стратегии и клинические испытания

Трансплантация инкапсулированных островков: стратегии и клинические испытания

Brian Buder, et al.

239ИММУННАЯ СЕТЬ Том. 13, No. 6: 235-239, декабрь 2013 г.

островков поджелудочной железы.

Трансплантация клеток.

18: 195-201.

14. Lembert, N., J. Wesche, P. Petersen, M. Doser, P. Zschocke,

H. D. Becker и H. P. Ammon. 2005 г.Инкапсуляция is-

проникает в шершавую поверхность, гидроксиметилированный полисульфоновый капил-

лари стимулирует высвобождение VEGF и способствует васкуляризации

после трансплантации.

Трансплантация клеток.

14: 97-108.

15. Vaithilingam, V. and B.E. Tuch. 2011. Трансплантация островков

и инкапсуляция: обновленная информация о последних событиях.

Ред.

Diabet. Stud.

8: 51-67.

16.Лим, Ф. и А. М. Сан. 1980. Микроинкапсулированные островки как био —

искусственная эндокринная поджелудочная железа.

Наука

210: 908-910.

17. Соуза, Ю. Э., Э. Чайб, П. Г. Ласерда, А. Крещенци, А.

Бернал-Филью и Л. А. Д’Альбукерке. 2011. Островок транс-

плантации грызунов. Действительно ли работают инкапсулированные островки?

Арк. Гастроэнтерол.

48: 146-152.

18. Сузуки, К., С. Боннер-Вейр, Н.Триведи, К. Х. Юн, Дж.

Холлистер-Лок, К. К. Колтон и Г. К. Вейр. 1998. Функция

и выживаемость макроинкапсулированных сингенных островков транс-

, посаженных в мышей с диабетом стрептозоцина.

Трансплантация

66:

21-28.

19. Duvivier-Kali, V. F., A. Omer, M. D. Lopez-Avalos, J. J.

O’Neil, and G.C Weir. 2004. Выживание микрокапсулированных

островков взрослых свиней у мышей, несмотря на ответ антител.

Am.

J. Трансплантация.

4: 1991-2000.

20. Сун-Шионг, П., Э. Фельдман, Р. Нельсон, Р. Хайнц, К. Яо,

З. Яо, Т. Чжэн, Н. Меридет, Г. Скьяк-Брак, Т. Эспевик ,

О. Смидсрод и П. Сэндфорд. 1993. Долгосрочное излечение

диабета путем инъекции иммунозащищенных островков.

Proc.

Нац. Акад. Sci. США.

90: 5843-5847.

21. Дюфран, Д., Р. М. Геббельс, А. Сальез, Ю. Гио и П.

Gianello. 2006. Шестимесячная выживаемость микрокапсулированных свиней

островков и альгинатная биосовместимость у приматов: доказательство концепции

.

Трансплантация

81: 1345-1353.

22. Дюфран Д., Р. М. Геббельс и П. Джанелло. 2010. Макроинкапсуляция альгината

островков свиней позволяет корректировать индуцированный стрепто-

зотоцин диабет у приматов до 6 месяцев без иммуносупрессии

.

Трансплантация

90: 1054-1062.

23. Эллиотт, Р. Б., Л. Эскобар, П. Л. Тан, О. Гаркавенко, Р.

Калафиоре, П. Баста, А. В. Васконселлос, Д. Ф. Эмерих, К.

,

Танос и К. Бамбра. 2005. Внутрибрюшинное введение альгинат-инкап-

островков новорожденных свиней в плацебо-контролируемом исследовании

с участием 16 диабетических яванских приматов.

Пересадка. Proc.

37:

3505-3508.

24. Soon-Shiong, P., RE Heintz, N. Merideth, QX Yao, Z.

Yao, T. Zheng, M. Murphy, MK Moloney, M. Schmehl, M.

Harris, R. Мендес, Р. Мендес и П.А. Сэндфорд. 1994.

Инсулиновая независимость у пациента с диабетом 1 типа после трансплантации инкапсулированных островков

.

Ланцет

343: 950-951.

25. Вальдес-Гонсалес, Р. А., Л. М. Дорантес, Г. Н. Гарибей, Е.

Брахо-Бланше, А.Х. Мендес, Р. Давила-Перес, Р. Б. Эллиотт,

Л. Теран и Д. Дж. Уайт. 2005. Ксенотрансплантация por-

неонатальных островков клеток Лангерганса и Сертоли: 4-летнее исследование

.

евро. J. Endocrinol.

153: 419-427.

26. Вальдес-Гонсалес, Р., А.Л. Родригес-Вентура, DJ White,

Э. Брахо-Бланше, А. Кастильо, Б. Рамирес-Гонсалес, MG

Лопес-Сантос, Б. Х. Леон-Мансилья и Л.М. Дорантес. 2010.

Долгосрочное наблюдение за пациентами с сахарным диабетом 1 типа, транс-

, выращенных на островках новорожденных свиней.

Clin. Exp. Иммунол.

162:

537-542.

27. Эллиот Р. Б. 2011. Living Cell Technologies, Ltd, Прага,

Чешская Республика.

28. Чхабра П. и К. Л. Брейман. 2011. Текущее состояние им-

муномодулирующих и клеточных методов лечения в доклинической и

клинической трансплантации островков.

J. Ttransplant.

2011: 637692.

29. Gao, Q., L. L. Ma, X. Gao, W. Yan. П. Уильямс и Д.

П. Инь. 2010. TLR4 опосредует раннюю недостаточность трансплантата после интрапортальной трансплантации

островков.

Am. J. Transplant.

10: 1588-1596.

30. Су, Дж., Б. Х. Ху, В. Л. Лоу, младший, Д. Б. Кауфман, и П.

Б. Мессерсмит. 2010. Противовоспалительные пептидно-функциональные

гидрогелей для инкапсуляции секретирующих инсулин клеток.

Bio-

материалов

31: 308-314.

31. Bunger, C. M., B. Tiefenbach, A. Jahnke, C. Gerlach, T.

Freier, K. P. Schmitz, U. T. Hopt, W. Schareck, E. Klar, and

P. de Vos. 2005. Удаление тканевого ответа против альги-

nate-pll капсул путем временного высвобождения совместно инкапсулированных стероидов

.

Биоматериалы

26: 2353-2360.

32. Дионн, К. Э., К.К. Колтон, М. Л. Ярмуш. 1993. Влияние гипоксии

на секрецию инсулина изолированными крысами и собаками составляет —

лангерганса.

Диабет

42: 12-21.

33. Kuhtreiber, W. M., R. P. Lanza, A. M. Beyer, K. S. Kirkland,

,

и W. L. Chick. 1993. Связь между секрецией инсулина и напряжением кислорода в гибридных диффузионных камерах.

ASAIO

J.

39: M247-251.

34. Де Вос П., Дж. Ф. Ван Страатен, А. Г. Ньивенхёйзен, М. де

Гроот, Р. Дж. Плоег, Б. Дж. Де Хаан и Р. Ван Шильфгаард.

1999. Почему микрокапсулированные островковые трансплантаты не работают при отсутствии чрезмерного фиброзного роста?

Диабет

48: 1381-1388.

35. Pedraza, E., M. M. Coronel, C. A. Fraker, C. Ricordi, и

,

C. L. Stabler. 2012. Предотвращение гибели клеток, вызванной гипоксией, в

бета-клетках и островках с помощью гидролитически активированных кислород-генерирующих

биоматериалов.

Proc. Natl. Акад. Sci. США.

109:

4245-4250.

36. Фритчи В. М., Дж. Х. Штруббе, Г. Х. Вольтерс и Р. ван

Шильфгаард. 1991. Толерантность к глюкозе и инсулин плазмы повторно

после внутривенной инфузии глюкозы и пробного завтрака у крыс

с микрокапсулированными островковыми аллотрансплантатами.

Диабетология

34: 542-

547.

37. Ханна, О., М. Л. Мойя, Э.К. Опара и Э. М. Брей. 2010.

Синтез многослойных альгинатных микрокапсул для приостановленного высвобождения фактора роста фибробластов-1.

J. Biomed. Матер.

Рез. А.

95: 632-640.

38. Людвиг Б., К. Г. Циглер, А. В. Шалли, К. Рихтер, А.

Штеффен, Н. Ябс, Р. Х. Функ, М. Д. Брендель, Н. Л. Блок,

М. Эрхарт-Борнштейн и С. Р. Борнштейн. 2010. Агонист

гормона, высвобождающего гормон роста, как потенциальный эффектор для выживания

и пролиферации островков поджелудочной железы.

Proc. Natl.

Акад. Sci. США.

107: 12623-12628.

Дефицит Bach2 защищает β-клетки поджелудочной железы от окислительного стресса — Университет Тохоку

TY — JOUR

T1 — Дефицит Bach2 защищает β-клетки поджелудочной железы от окислительного стресса

AU — Kondo, Keushiichi

AU — Ishigaki AU — Ishigaki AU

AU — Gao, Junhong

AU — Yamada, Tetsuya

AU — Imai, Junta

AU — Sawada, Shojiro

AU — Muto, Akihiko

AU — Oka

— Yarashito

AU — Katagiri, Hideki

PY — 2013

Y1 — 2013

N2 — BTB и гомология CNC 1 (Bach2) является репрессором транскрипции антиоксидантных ферментов, таких как гемоксигеназа-1 (HO-1).Сообщается, что оксидативный стресс участвует в нарушении секреции инсулина и инсулинорезистентности, связанной с ожирением. Однако роль Bach2 в развитии диабета неясна. Экспрессия HO-1 в печени, белой жировой ткани и островках поджелудочной железы была заметно повышена у Bach2-дефицитных мышей. Неожиданно тесты на толерантность к глюкозе и инсулину не показали различий у тучных мышей дикого типа (WT) и тучных мышей с дефицитом Bach2 после нагрузки с высоким содержанием жиров в течение 6 недель, что свидетельствует о минимальной роли Bach2 в развитии инсулинорезистентности.Напротив, дефицит Bach2 значительно подавлял вызванное аллоксаном снижение содержания инсулина поджелудочной железы и, как следствие, повышение уровня глюкозы. Кроме того, TUNEL-положительные клетки в островках поджелудочной железы мышей с дефицитом Bach2 были заметно уменьшены, на 60%, по сравнению с таковыми у мышей WT. Экспрессия HO-1 в островках была значительно повышена у мышей с дефицитом Bach2, которым вводили аллоксан, тогда как экспрессия других антиоксидантных ферментов, например, каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы, не изменялась ни при введении аллоксана, ни при дефиците Bach2.Наши результаты показывают, что дефицит Bach2 защищает β-клетки поджелудочной железы от апоптоза, вызванного окислительным стрессом, и что усиление экспрессии HO-1 играет важную роль в этой защите.

AB — BTB и CNC homology 1 (Bach2) является репрессором транскрипции антиоксидантных ферментов, таких как гемоксигеназа-1 (HO-1). Сообщается, что оксидативный стресс участвует в нарушении секреции инсулина и инсулинорезистентности, связанной с ожирением. Однако роль Bach2 в развитии диабета неясна.Экспрессия HO-1 в печени, белой жировой ткани и островках поджелудочной железы была заметно повышена у Bach2-дефицитных мышей. Неожиданно тесты на толерантность к глюкозе и инсулину не показали различий у тучных мышей дикого типа (WT) и тучных мышей с дефицитом Bach2 после нагрузки с высоким содержанием жиров в течение 6 недель, что свидетельствует о минимальной роли Bach2 в развитии инсулинорезистентности. Напротив, дефицит Bach2 значительно подавлял вызванное аллоксаном снижение содержания инсулина поджелудочной железы и, как следствие, повышение уровня глюкозы.Кроме того, TUNEL-положительные клетки в островках поджелудочной железы мышей с дефицитом Bach2 были заметно уменьшены, на 60%, по сравнению с таковыми у мышей WT. Экспрессия HO-1 в островках была значительно повышена у мышей с дефицитом Bach2, которым вводили аллоксан, тогда как экспрессия других антиоксидантных ферментов, например, каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы, не изменялась ни при введении аллоксана, ни при дефиците Bach2. Наши результаты показывают, что дефицит Bach2 защищает β-клетки поджелудочной железы от апоптоза, вызванного окислительным стрессом, и что усиление экспрессии HO-1 играет важную роль в этой защите.

кВт — апоптоз

кВт — гомология BTB и ЧПУ 1

кВт — диабет

кВт — инсулин

кВт — окислительный стресс

кВт — панкреатический

кВт — β-клетки 9000 —

www.scopus.com/inward/record.url?scp=84883765384&partnerID=8YFLogxK

UR — http://www.scopus.com/inward/citedby.url?scp=84883765384&partnerID=8YFLogxK

54 UR 00120.2013

DO — 10.1152 / ajpendo.00120.2013

M3 — Article

C2 — 23880309

AN — SCOPUS: 84883765384

VL — 305

SP — E641-E648

JO — Американский журнал физиологии — эндокринология и метаболизм

— Эндокринология и метаболизм

SN — 0002-9513

IS — 5

ER —

004824 — BTBR.Cg-Lep / WiscJ

Мыши, гомозиготные по спонтанной мутации ожирения ( Lep ^ob , обычно обозначаемые как ob или ob / ob ), демонстрируют гиперфагию ожирения, диабетоподобный синдром гипергликемии, непереносимость глюкозы, повышенный инсулин в плазме, недостаточность фертильности. , нарушение заживления ран и увеличение выработки гормонов как гипофизом, так и надпочечниками.Они также гипометаболические и гипотермические.

Ожирение характеризуется увеличением как количества, так и размера адипоцитов. Хотя гиперфагия способствует ожирению, гомозиготы набирают лишний вес и откладывают лишний жир даже при ограничении диеты, достаточной для поддержания нормального веса у худых мышей. Гиперинсулинемия развивается только после увеличения массы тела и, вероятно, является его результатом. Гомозиготы имеют аномально низкий порог стимуляции секреции инсулина островками поджелудочной железы даже у очень молодых животных с предрасположенностью к ожирению.

Как и в случае с мышами, несущими мутацию диабета ( Lepr ^db ), проявление диабетического синдрома сильно зависит от генетического фона. Lep ^ob гомозигот на фоне BTBR заболевают диабетом в возрасте шести недель (мужчины) и восьми недель (женщины). Гипергликемия является тяжелой и прогрессирующей с уровнем глюкозы в плазме натощак 400 мг / дл через 10 недель (Stoehr et al., 2000). В отличие от гомозигот на фоне C57BL / 6, у гомозигот BTBR развивается крайнее ожирение (Stoehr et al., 2004) и прогрессирующей гипертриглицеридемии (Lan et al., 2003). Липогенез печени не увеличивается, и у гомозигот не развивается стеатоз печени (Lan et al., 2003). У мужчин сохраняется гиперинсулинемия, хотя уровень инсулина и масса островков значительно снижаются (личное сообщение Stoehr).

Два локуса-модификатора ( Mobe1, Mobe2 , ранее Moo1 и Moo2 ) регулируют общую массу жира. Аллели BTBR этих локусов полудоминантно увеличивают массу тела (Stoehr et al., 2004).

Модель мышей с диабетом BTBR ob / ob имитирует ключевые особенности ранней диабетической нефропатии у людей, но с хроническим повреждением, ограниченным клубочками (Björnson Granqvist, 2019). У мышей, получавших диету с высоким содержанием белка (HPD; 30%), наблюдаются усиленные метаболические нарушения, о чем свидетельствует дальнейшее повышение уровней глюкозы, HbA _1C , холестерина и аланинаминотрансферазы.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.