Рустан станки: Продажа и поставки станков в Москве

Содержание

Контакты ООО «Компания «РуСтан»

Наши реквизиты:	ООО «Компания «РуСтан» ИНН/КПП 7716739331/771601001 Адрес: 129343, г. Москва, проезд Серебрякова, дом 6 ОГРН 1137746186577 от 4 марта 2013 г. Банковские реквизиты: р/с 40702810138090011088 в ПАО Сбербанк г.Москва БИК 044525225 к/с 30101810400000000225
Телефон/факс:	Отдел продаж (центральный офис): +7 (495) 150-05-90 8 (800) 500-63-48 (федеральный бесплатный номер) Тендерный отдел: +7(495) 150-05-90, доб. 104 Бухгалтерия: +7(495) 150-05-90, доб. 103 Факс: +7 (495) 150-05-90, доб. 2.
Расписание работы:	Пн-пт с 9-00 до 17-30, обед с 13-00 до 14-00.
E-mail:	[email protected]
Адрес сайта в интернет:	https://RuStan.ru
Юридический и фактический адрес «РуСтан»:	129343, г. Москва, проезд Серебрякова, дом 6 («Деловой центр Серебрякова», 5 этаж.). метро «Ботанический сад» (700 метров, выход на проезд Серебрякова).
Схема проезда в центральный московский офис: г. Москва, проезд Серебрякова, дом 6.
Адреса складов в Москве и Московской области:	1. Основной склад станков Россия, г. Москва, Сигнальный проезд 16с21, Склад №123. м.Владыкино, 8-991-931-25-48, 8(925)744-65-71 Антон. (Если телефон недоступен внутри склада второй пролет, далее направо вторая дверь слева. бокс №123) 2. Московская область, пос. Томилино, ул. Гоголя, д. 39/1 (складская база «ЛАЗУРЬ»). 3. Склад болгарских станков ZMM г. Москва, пос. Курилово, ул. Школьная, д. 4 4. Склад станков TRIOD Московская область, г. Королев, ул. Силикатная, д.65; Пн — Пт с 9-00 до 17-00 (МСК), обед с 13 до 14 часов, Cб — Вс выходной.
Склад станков JET в Санкт-Петербурге	г. Санкт-Петербург, поселок Шушары, ул. Поселковая, д.8В, терминал «Модуль Южный», ворота №24-25 Пн — Пт с 9-00 до 17-30 (МСК), обед с 13 до 14 часов, Cб — Вс выходной. Телефон: +7 (812) 334-33-28 (доб.221, 222, 223) (Алексей, Андрей, Ксения) Предварительно необходимо заказывать пропуск, согласовывать условия загрузки (минимум за полчаса до приезда, уточнять время при заказе пропуска). Для заезда на территорию терминала обязательно наличие светоотражающего жилета и документа удостоверяющего личность. Обращаем Ваше внимание, что скорость передвижения по территории терминала не более 5 км/ч с обязательно включенной аварийной сигнализацией и соблюдением всех дорожных знаков.
Отделение «РуСтан — Екатеринбург»	Адрес склада-офиса: г. Екатеринбург, ул. Сибирский тракт 12, строение 17.
Отделение «РуСтан — Ростов-на-Дону»	Адрес склада-офиса: г. Ростов-на-Дону, пр. Будённовский, 97.
Отделение «РуСтан — Ижевск»	Адрес склада-офиса: г. Ижевск, ул. Воткинское шоссе, д. 146.
Отделение «РуСтан — Пермь»	Адрес склада-офиса: г. Пермь, ул. Промышленная, д. 155.
Отделение «РуСтан — Нижний Новгород»	Адрес склада-офиса: г. Нижний Новгород, ул. Памирская, д. 11.
Отделение «РуСтан — Оренбург»	Адрес склада-офиса: г. Оренбург, ул. Центральная, 1.
Отделение «РуСтан — Владимир»	Адрес склада-офиса: Владимирская область, Александровский р-н, пос. Балакирево, ул. Центральная, д. 1А.
Отделение «РуСтан — Иваново»	Адрес склада-офиса: г. Иваново, ул. Станкостроителей, д. 5.
Отделение «РуСтан — Новосибирск»	Адрес склада-офиса: г. Новосибирск, ул. Окружная, д. 29.
Отделение «РуСтан — Воронеж»	Адрес склада-офиса: г. Воронеж, проспект Труда, д. 63А.
Отделение «РуСтан — Киров»	Адрес склада-офиса: г. Киров, ул. Тургенева, д. 4.
Отделение «РуСтан — Челябинск»	Адрес склада-офиса: г. Челябинск, ул. Кожзаводская 138, оф. 18.
Отделение «РуСтан — Самара»	Адрес склада-офиса: г. Самара, ул. XXII Партсьезда, 7А.
Отделение «РуСтан — Казань»	Адрес склада-офиса: г. Казань, ул. Набережная, д. 11.
Отделение «РуСтан — Красноярск»	Адрес склада-офиса: г. Красноярск, ул. Читинская, д. 6.
Отделение «РуСтан — Тюмень»	Адрес склада-офиса: г. Тюмень, ул. Гилевская роща, 4.

OOO ПКФ Промресурс (Rustan) — rustan.ru

Если Вам требуется качественное деревообрабатывающее, кузнечнопрессовое и металлорежущее оборудование, то советуем обратиться к менеджерам производственно — коммерческой фирмы Промресурс.

В каталоге представлен огромный ассортимент оборудования, и Вы сможете без труда подобрать именно тот станок, который будет максимально соответствовать производственным нуждам Вашего предприятия.

OOO ПКФ Промресурс предлагает только надёжные и долговечные фрезерные обрабатывающие центры с ЧПУ, которые делаются в таких странах, как Болгария, Китай и Тайвань.

Производственно коммерческая фирма Промресурс (Рустан) в течение длительного времени поставляет на российский рынок качественное деревообрабатывающее, металлорежущее и кузнечнопрессовое оборудование.

Среди обширного ассортимента станков фирмы Промресурс (Рустан), предлагаемых нашей компанией, особой популярностью пользуются фрезерные станки с ЧПУ, широко используемые во многих отраслях промышленности. Такое оборудование незаменимо при высокоточном производстве штампов, деталей, пресс-форм и т.д.

Станочное фрезерное оборудование с ЧПУ предназначено для выполнения широкого спектра работ, а именно: сверлильных, фрезерных, расточных и других.

Все операции осуществляются на деталях средних размеров в небольшом серийном либо одиночном производстве. В зависимости от способа расположения шпинделя,фрезерные обрабатывающие центры с ЧПУ, подразделяются на горизонтальные и вертикальные. Всё станочное оборудование, предлагаемое Промресурс (Рустан), отличается высокой скоростью резанья, исключительной надёжностью и точностью позиционирования инструмента. Достигнуть таких показателей удаётся благодаря применению прецизионных электронных и механических комплектующих, выпускаемых такими мировыми производителями как SKF, Star, THK, Timken, Siemens, Mitsubishi, Fagor, Heidenhain, Fanuc. Кроме того, в производстве фрезерных станов с ЧПУ используются современные средства контроля изготовления пресс-форм, качественные и точные подшипники и инновационные решения в конструкции и компоновке станков. Фрезерное станочное оборудование стандартно оснащается системой ЧПУ FANUC 0 iMate — MB. Однако Рустан всегда прислушивается и учитывает пожелания наших клиентов, поэтому может установить такие системы как FANUC 18i-MB, FANUC 0i-MB, Heidenhain TNC410M, TNC425M, Siemens 802D и т.д. Кроме того, в качестве исполнительных приводов компания Промресурс использует цифровые привода серии FANUC Power Mate i-MODEL D оснащенные электродвигателями серии iS series / iF series. Связь между приводом и устройством управления осуществляется при помощи шины PROFIBUS.

Мы предлагаем нашим заказчикам только современные, качественные и надёжные фрезерные обрабатывающие центры с ЧПУ, которые производятся в таких странах как Тайвань, Болгария и Китай. Всё станочное оборудование имеет необходимые сертификаты, доступную стоимость и хорошо себя зарекомендовало среди российских потребителей. Ознакомиться с полным перечнем предлагаемого нами оборудования Вы можете на данном сайте. Позвоните нам в офис или оставьте электронное сообщение. Наши специалисты проконсультируют Вас по поводу стоимости и наличия станков на складе, а также уточнят сроки доставки интересующего Вас оборудования непосредственно на объект.

На сегодняшний день компания Рустан работает с ведущими станкостроительными заводами по производству станков и станочного оборудования, такими как: Рязанский станкостроительный завод — РСЗ, Нижегородский завод Фрезерный станков — ЗЕФС, Сасовский станкостроительный завод — САСТА, Дмитровский завод Фрезерных станков — ДЗФС, Воткинский станкостроительный завод, Астраханский станкостроительные завод, Армавирский механический завод — Армез, Челябинский станкостроительный завод, Стерлитамакский станкостроительный завод и т.д., Белоруссии: РУП Гомельский завод станочных узлов, Оршанский завод «Красный Борец», Витебский станкостроительный завод «ВИСТАН», РУП «Гомельский станкостроительный завод им. С. М. Кирова» Украины, Болгарии: ARSENAL, ZMM-BULGARIA HOLDING, EMI PLC, RAIS.

За годы деятельности Рустан, система работы с поставщиками отлажена настолько, что позволяет осуществить доставку станков клиенту в самые сжатые сроки. В случае необходимости, вы можете самостоятельно забрать приобретенное оборудование на наших складах расположенных в Москве, Ижевске и Воткинске.

Сотрудничество с транспортными компаниями позволяет организовать доставку станочного оборудования до подъезда заказчика в самые короткие сроки.

Отгрузка станков осуществляется со складов в г.Ижевск, г.Воткинск, г.Москва. Доставка осуществляется автомобильным и ж/д транспортом в т.ч. и компаниями грузоперевозчиками такими, как ООО «Автотрейдинг», ООО «Желдорэкспедиция», ООО «ПЭК», ООО «Деловые линии» и т.д.

Нужен станок? Надёжный поставщик компания РуСтан

Компания «РуСтан»: европейское качество по доступным ценам

«РуСтан» – ведущий поставщик станочного, строительного, складского и другого оборудования. Компания предлагает полный комплекс услуг, который включает в себя продажу станков, доставку, пусковые и наладочные работы, а также техническое обслуживание оборудования. Компания является официальным дилером ведущих производителей, что позволяет вам приобретать качественное оборудование без переплат. Ознакомиться с каталогом и проконсультироваться по всем интересующим вопросам можно на официальном сайте компании https://rustan.ru/.

Оборудование от компании «РуСтан» – основа надёжного и современного производства

Сегодня практически ни одно производство невозможно представить без станочного оборудования от компании «РуСтан». Данная организация предлагает современные станки, которые отличаются повышенной мощностью, надёжностью, высокой производительностью и длительным сроком службы. Компания всегда стремимся соответствовать требованиям, которые предъявляют наши партнеры, благодаря чему она завоевала доверие клиентов по всей стране.

С помощью деревообрабатывающих и металлообрабатывающих станков от компании «РуСтан» вы сможете ускорить любые производственные процессы, сократите расходы, повысите качество выпускаемой продукции, а за счет своей надежности оно позволит вам избежать любых финансовых потерь. Если же у вас возникнут вопросы, то специалисты проконсультируют вас, и помогут подобрать оптимальное решение для вашего бизнеса. «РуСтан» это синоним качества, на которое ориентируется любой поставщик станочного оборудования.

Широкий спектр оборудования по выгодной цене

В каталоге представлен огромный выбор станков, дополнительного оборудования, оснастки, различных аксессуаров и комплектующих. Благодаря столь широкому выбору вы сможете найти и выбрать станки для малого бизнеса и крупносерийного производства, для цеха или небольшой частной мастерской. Вы с легкостью организуете новые производственные мощности, а также модернизируете или автоматизируете существующие линии.

Также компания предлагает купить универсальные станки. Они отличаются тем, что способны выполнять несколько операций одновременно. Сделав выбор в пользу такого оборудования, вы сэкономите на оснащении своего предприятия, а также ускорите процесс производства.

Почему клиенты выбирают «РуСтан»

Цель компании – обеспечить заказчиков современным высокотехнологичным оборудованием для повышения эффективности на производстве. Именно поэтому «РуСтан» предлагает своим клиентам только проверенную продукцию, которая прошла всесторонние испытания. На официальном сайте компании вы найдёте:

станки по металлу
светотехническое оборудование
прессы
ричтраки и складское оборудование
бетономешалки и тепловые пушки
центры для обработки различных металлов

В демо-зале вы можете проверить и оценить оборудование в работе еще до его покупки. Это позволяет исключить производственные риски и даёт полную уверенность в правильности выбора. Также компания оказывает услуги по доставке, наладке и сервисному обслуживанию.

Выбрав оборудование «РуСтан», вы можете быть уверены, что ваше предприятие будет работать без сбоев на протяжении длительного времени.

«Компания RuStan» — контакты, товары, услуги, цены

ООО «Компания «РуСтан» в течение длительного времени поставляет на Российский рынок качественное деревообрабатывающее, металлорежущее и кузнечно-прессовое оборудование.

Просьба, при телефонном звонке сообщить что нашли нас на Tiu.ru

Мы предлагаем нашим заказчикам только современное, качественное и надёжные оборудование, которые производимое ведущими станкостроительными гигантами в таких странах как Россия, Тайвань, Болгария и Китай.

Всё станочное оборудование имеет необходимые сертификаты, доступную стоимость и хорошо себя зарекомендовало среди российских потребителей.

На сегодняшний день мы работаем с ведущими станкостроительными заводами по производству станков и станочного оборудования, такими как: Рязанский станкостроительный завод — РСЗ, Нижегородский завод Фрезерный станков — ЗЕФС, Сасовский станкостроительный завод — САСТА, Дмитровский завод Фрезерных станков — ДЗФС, Воткинский станкостроительный завод, Астраханский станкостроительные завод, Армавирский механический завод — Армез, Челябинский станкостроительный завод, Стерлитамакский станкостроительный завод и т.д., Белоруссии: РУП Гомельский завод станочных узлов, Оршанский завод «Красный Борец», Витебский станкостроительный завод «ВИСТАН», РУП «Гомельский станкостроительный завод им. С. М. Кирова» Украины, Болгарии: ARSENAL, ZMM-BULGARIA HOLDING, EMI PLC, RAIS.

За годы нашей деятельности, система работы с поставщиками отлажена настолько, что позволяет осуществить доставку станков клиенту в самые сжатые сроки. В случае необходимости, вы можете самостоятельно забрать приобретенное оборудование на наших складах расположенных в Москве, Ижевске и Воткинске.

СТАНКИ МОГУТ ПРИОБРЕСТИ не только юридические, но и ФИЗИЧЕСКИЕ ЛИЦА. Сотрудничество с транспортными компаниями позволяет организовать доставку станочного оборудования до подъезда заказчика в самые короткие сроки.

Отгрузка станков осуществляется со складов в г.Москва, г.Ижевск, г.Н.Новгород, г.Ростов-на-Дону, г.Санкт-Петербург. Доставка осуществляется автомобильным и ж/д транспортом в т.ч. и компаниями грузоперевозчиками такими, как ООО «Автотрейдинг», ООО «Желдорэкспедиция», ООО «ПЭК», ООО «Деловые линии» и т.д.

На базе нашего предприятия организовано производство по ремонту токарных трубонарезных и фрезерных станков:

Фрезерные станки ВМ127М, ВМ130М, ВМ131ВФ1, 6Т13, 6Т12
Токарные станки 1К62, 1К625, CU500
Сверлильные станки 2С125, 2С132, 2Н135
Трубонарезных станков 1А983, 1Н983, 9М14, 9М14Ф101

Начиная с 2007г совместно с рядом предприятий смежной отрасли, РуСтан освоило производство трубной продукции для нужд нефтегазового комплекса.
В настоящее время ассортимент предлагаемой продукции составляет более 500 наименований:

Трубы бурильные;
Трубы насосно-компрессорные;
Трубы обсадные;

Ознакомиться с полным перечнем предлагаемого нами оборудования Вы можете на данном сайте.
Наши специалисты проконсультируют Вас по поводу стоимости и наличия станков на складе, а также уточнят сроки доставки интересующего Вас оборудования непосредственно на объект.

Высококвалифицированный персонал, грамотная подготовка производства и высокоточный инструмент мировых лидеров позволяют выпускать и поставлять качественную и востребованную продукцию, как для России, так и за рубеж.

Продуманная транспортно-складская логистика позволяет осуществлять быструю и качественную отгрузку, а также минимизировать Ваши расходы на маршрут и вид транспорта.

Мы предлагаем Вам разнообразные варианты сотрудничества — это могут быть как разовые покупки любых партий металлопроката, так и комплексное обслуживание предприятий. Каждому клиенту обеспечивается индивидуальный подход в работе.

Гибкая система скидок построена таким образом, чтобы Вы получили максимальную выгоду от нашего совместного сотрудничества.

Мы будем рады видеть Вас клиентами нашей компании.

токарные станки с ЧПУ, фрезерные станки

Токарные станки

Токарный станок является оборудованием для обработки с помощью метода резания (точения) заготовок из металлов или других материалов. Токарные станки обеспечивают функциональные возможности обточки и расточки конических, цилиндрических либо фасонных поверхностей, нарезания резьбы, подрезки и обработки торцов, зенкерования, сверления и развертывания отверстий и пр. Токарное оборудование включает девять видов станков, различающихся по конструктивной компоновке, назначению, автоматизации и другим параметрам…

Фрезерные станки

Для обработки внутренних и наружных фасонных поверхностей, фрезерования резьб, прорезки винтовых и прямых канавок применяются фрезерные станки. Станки оснащены фрезой — режущим многолезвийным инструментом, закрепленном в шпинделе. Вращение фрезы является главным (вращательным) движением, движение подачи — относительное перемещение заготовки и фрезы. В производстве применяются различные виды фрезерных станков, в зависимости от необходимых операций с заготовками…

Шлифовальные станки

Шлифовальные станки применяются для финишной (точной в отношении вида поверхности обработки и размеров) работы с металлами, деревом, работы с камнем и подобными материалами. Обработка деталей происходит за счет быстровращающегося шлифовального круга. Подразделяются на плоскошлифовальные, круглошлифовальные для наружной шлифовки, бесцентровые, внутришлифовальные — в зависимости от выполняемых работ…

Сверлильные станки

Сверлильные станки предназначены для рассверливания, зенкования, нарезания наружной и внутренней резьб, развертывания отверстий, зенкерования, операций сверления. При этом обрабатываются торцевые поверхности отверстий, конические и внутренние цилиндрические. В зависимости от расположения шпинделя (горизонтальное либо вертикальное) и специализации станка выделяют несколько видов сверлильных станков: радиально-сверлильные, вертикально-сверлильные, горизонтально-расточные, координатно-расточные…

Расточные станки

Расточные станки используются в условиях серийного и индивидуального производства для обработки заготовок наиболее крупных размеров. Производится обтачивание цилиндрических поверхностей, нарезание наружной и внутренней резьб, торцовое и цилиндрическое фрезерование, растачивание, сверление. Шпиндель (вертикальный либо горизонтальный) совершает движение осевой подачи. Борштанга с резцами, зенкер, фреза, сверло — режущий инструмент — закрепляется в отверстии шпинделя…

Заточные станки

Функцией заточного станка является переточка и заточка металлорежущего инструмента. В основном применяются заточные станки с образивными шлифовальными кругами. Универсальные заточные станки применяются для шлифования, доводки слесарного, дереворежущего инструмента: цепных пил, ленточных пил, дисковых пил, кромок правых и левых сверл, фасонных острозаточенных и торцовых фрез. Специализированные заточные станки используются для работы с определенными видами многолезвийного инструмента…

СК Роутер — фрезерные и токарные станки с ЧПУ

СК «Роутер» — российский производитель современных фрезерных и гравировальных станков с числовым программным управлением (ЧПУ) и другого промышленного оборудования специального назначения (3D-принтеры, машины для литья пластмасс, жарочные машины и пр.).

Мы изготавливаем координатные 3-х, 4-х и 5-ти осевые станки с ЧПУ полностью и самостоятельно на собственной производственной базе в Солнечногорском районе Московской области, поэтому выпускаемое оборудование можно в полной мере назвать отечественными станками с ЧПУ. Также в подтверждение этому может служить соответствие наших станков требованиям российского ГОСТа 12.2.009-99 «Станки металлообрабатывающие. Общие требования безопасности».

Производственный коллектив СК «Роутер»

Назначение и обрабатываемые материалы

Мы выпускаем станки с ЧПУ, предназначенные для решения большого круга производственных задач: от универсальных многофункциональных станков до оборудования узкоспециального назначения (стоматологические станки, станки для ювелиров и пр.).

Наши станки позволяют обрабатывать широкий спектр материалов: дерево, фанеру, ДСП, МДФ, металлы, сплавы, в том числе конструкционную и инструментальную сталь, натуральные и искусственные камни, пластики, композиты и многое другое.

Всё это делает наши станки применимыми в различных отраслях, а взвешенная ценовая политика и выгодные условия приобретения (рассрочка, лизинг) — доступными даже для представителей малого бизнеса.

Станки в наличии и на заказ

На производственной базе обустроен демонстрационный зал (шоу-рум), в котором можно увидеть наше фрезерно-гравировальное оборудование в работе «под нагрузкой», получить исчерпывающие консультации от инженеров, а также купить станок с ЧПУ из наличия.

Мы не ограничиваемся изготовлением только серийной продукции. Наличие собственной производственной базы и конструкторского отдела позволяет нам проектировать и выпускать станки с ЧПУ на заказ, решая под час совсем нетривиальные задачи наших покупателей.

Этой услугой уже воспользовались десятки наших клиентов от коммерческих компаний до государственных предприятий, в том числе и представителей «оборонки», что подтверждает наш статус профессионального и ответственного производителя российских станков с ЧПУ.

Интерьер крем-отделяющей комнаты. Ферма братьев Рустан недалеко от Диккенса, штат Айова — цифровой файл с оригинального нег.

Черно-белые негативы, содержащиеся в Управлении безопасности фермы / Бюро военной информации Библиотеки Конгресса, находятся в открытом доступе и могут свободно использоваться и повторно использоваться.

Кредитная линия: Библиотека Конгресса, Отдел эстампов и фотографий, Управление безопасности фермы / Управление военной информации, черно-белые негативы.

Для получения информации о воспроизведении, публикации и цитировании материалов из этой коллекции, а также о доступе к оригинальным элементам см .: U.S. Farm Security Administration / Управление военной информации. Черно-белые фотографии — информация о правах и ограничениях.

Подробнее об авторских правах и других ограничениях

Чтобы получить рекомендации по составлению полных цитат, обратитесь к цитированию первичных источников.

Информация о правах человека : Нет известных ограничений. Для получения дополнительной информации см. Черно-белые фотографии Управления безопасности фермерских хозяйств США / Управления военной информации https: // www.loc.gov/rr/print/res/071_fsab.html
Номер репродукции : LC-DIG-fsa-8a21355 (цифровой файл с оригинального нег.) LC-USF33-011075-M2 (ч / б пленка нитратная негр.)
Телефонный номер : LC-USF33- 011075-M2 [P&P] LOT 1156 (соответствующий фотопринт)
Информация о доступе : —

Получение копий

Если изображение отображается, вы можете скачать его самостоятельно.(Некоторые изображения отображаются только в виде эскизов за пределами Библиотеке Конгресса США из-за соображений прав человека, но у вас есть доступ к изображениям большего размера на сайт.)

Кроме того, вы можете приобрести копии различных типов через Услуги копирования Библиотеки Конгресса.

Если отображается цифровое изображение: Качество цифрового изображения частично зависит от того, был ли он сделан из оригинала или промежуточного звена, такого как копия негатива или прозрачность.Если вышеприведенное поле «Номер воспроизведения» включает номер воспроизведения, который начинается с LC-DIG …, то есть цифровое изображение, сделанное прямо с оригинала и имеет достаточное разрешение для большинства публикационных целей.
Если есть информация, указанная в поле «Номер репродукции» выше: Вы можете использовать номер репродукции, чтобы купить копию в Duplication Services. Это будет составлен из источника, указанного в скобках после номера.
Если указаны только черно-белые («черно-белые») источники, и вы хотите, чтобы копия показывала цвет или оттенок (если они есть на оригинале), вы обычно можете приобрести качественную копию оригинал в цвете, указав номер телефона, указанный выше, и включив каталог запись («Об этом элементе») с вашим запросом.
Если в поле «Номер репродукции» нет информации, указанной выше: Как правило, вы можете приобрести качественную копию через Службу тиражирования.Укажите номер телефона перечисленных выше, и включите запись каталога («Об этом элементе») в свой запрос.

Прайс-листы, контактная информация и формы заказа доступны на Веб-сайт службы дублирования.

Доступ к оригиналам

Выполните следующие действия, чтобы определить, нужно ли вам заполнять квитанцию о звонках в Распечатках. и Читальный зал фотографий для просмотра оригинала (ов). В некоторых случаях суррогат (замещающее изображение) доступны, часто в виде цифрового изображения, копии или микрофильма.

Товар оцифрован? (Уменьшенное (маленькое) изображение будет видно слева.)
- Да, товар оцифрован. Пожалуйста, используйте цифровое изображение вместо того, чтобы запрашивать оригинал. Все изображения могут быть смотреть в большом размере, когда вы находитесь в любом читальном зале Библиотеки Конгресса. В некоторых случаях доступны только эскизы (маленькие) изображения, когда вы находитесь за пределами библиотеки Конгресс, потому что права на товар ограничены или права на него не оценивались. ограничения.
  В качестве меры по сохранности мы обычно не обслуживаем оригинальный товар, когда цифровое изображение доступен. Если у вас есть веская причина посмотреть оригинал, проконсультируйтесь со ссылкой библиотекарь. (Иногда оригинал слишком хрупкий, чтобы его можно было использовать. Например, стекло и пленочные фотографические негативы особенно подвержены повреждению. Их также легче увидеть в Интернете, где они представлены в виде положительных изображений.)
- Нет, товар не оцифрован. Пожалуйста, перейдите к # 2.
Указывают ли указанные выше поля Консультативного совета по доступу или Номер вызова, что существует нецифровой суррогат, типа микрофильмов или копий?
- Да, есть еще один суррогат. Справочный персонал может направить вас к этому суррогат.
- Нет, другого суррогата не существует. Перейдите к # 3.
Если вы не видите миниатюрное изображение или ссылку на другого суррогата, заполните бланк звонка. Читальный зал эстампов и фотографий. Во многих случаях оригиналы могут быть доставлены в течение нескольких минут. Другие материалы требуют записи на более позднее в тот же день или в будущем. Справочный персонал может посоветуют вам как заполнить квитанцию о звонках, так и когда товар может быть подан.

Чтобы связаться со справочным персоналом в Зале эстампов и фотографий, воспользуйтесь нашей Спросите библиотекаря или позвоните в читальный зал с 8:30 до 5:00 по телефону 202-707-6394 и нажмите 3.

Living Content 34. Интервью с Рустаном Сёдерлингом.

‍ Living Content: Для начала, учитывая, что мы все еще находимся в начале нового десятилетия, не могли бы вы рассказать мне о некоторых из ваших основных ступеней в вашей практике, которые привели вас туда, где вы находитесь сегодня?

Рустан Сёдерлинг: Когда я впервые посетил художественную школу в Гетеборге в подростковом возрасте, у нас было это открытое видео-задание, и я закончил тем, что снял четыре или пять видео, потому что я нашел это очень полезным.Я установил в своей квартире самодельные зеленые экраны и довольно быстро научился оживлять вещи. После окончания художественной школы я переехал в Амстердам, чтобы изучать графический дизайн, что в конечном итоге привело меня к тому, что я вообще отказался от работы с видео. Но годы спустя, постепенно осознав, что дизайн — это не моя чашка чая, я снова начал делать видео на стороне, как своего рода визуальный выход для того, что я читал и о чем думал. В то время как графический дизайн был основан на компромиссе и точности, работа с видео не обязательно должна соответствовать прихотям клиента или какой-то более масштабной коммерческой логике.В графическом дизайне мне также было скучно работать с материалами других людей, но при создании видео мне пригодилось присвоение; У меня не было проблем с выборкой или коллажированием найденного материала, и долгое время я работал в основном с найденным материалом. Только когда я сделал Eternal September , я действительно создал что-то с нуля, и даже это образцы такого количества материала, что это можно было считать сборником повествования. С этого момента большая часть моей работы была либо полностью анимирована, либо каким-то образом применялась CGI.

LC: В своих работах вы часто изображаете некое антиутопическое будущее; постчеловеческая среда. Не могли бы вы дать этому какой-то контекст?

RS : Я не считаю, что работа будет явно задана в будущем. Я избегаю намеков на то, чего на самом деле не могло быть в современной обстановке. Я предпочитаю думать о временном периоде как о неоднозначном: может быть, это будущее, может быть, это прошлое, или, может быть, это отдельный график от нашего.Я пытаюсь вызвать в воображении представления о мрачном прошлом, перетекающим в настоящее, или дать представление о потенциально катастрофическом будущем, но также подразумеваю круговую идею темпоральности. Очень похоже на чувство глубокой безвременья, которое часто проявляется в природе; где иногда кажется, что на самом деле ничего не меняется. Прогуливаясь по лесу, мы наступаем на несколько слоев мертвых вещей, находящихся на разных стадиях разложения. Эта мертвая материя питает живые существа, растущие и процветающие над землей, которые сами присоединятся к вечному кругу смерти и возрождения.Для меня это в равной степени присутствует в человеческой культуре, где те же изобретения, вопросы и желания, которые двигали нашими древними предками, все еще с нами, хотя и с более высокотехнологичным покрытием. Мы все вносим свой вклад в наше обширное коллективное хранилище памяти. Там, где деревья растут из мертвых листьев прошлым летом, мы возводим соборы из костей наших прадедов и прадедов.

LC: Какова роль природы в этой обстановке и по отношению к человеку?

RS: Я думаю, что с тех пор, как наши предки перестали поклоняться храмам и обнажениям природы и начали возводить свои собственные каменные памятники, между человечеством и природой возникло ощущение разобщенности.С тех пор природа взяла на себя как доброжелательную, так и злобную роль в обществе; и целитель, и убийца. Сбор грибов может обеспечить вкусный ужин, но если вы съедите не тот, то либо попадете в другое измерение, либо умрете в ужасных судорогах. Теперь мы больше осознаем наше собственное влияние на природу из-за глобального потепления и постепенно приходим к пониманию того, что в конце концов мы неотделимы от природы. Хотя мы думали, что «убиваем Мать-Землю», на самом деле мы покончили жизнь самоубийством.Фактически — по отношению ко всему, что нас волнует — слово «природа» излишне, поскольку наше размещение вне ее области было чисто надменной воображаемой конструкцией. Мы — человечество и его изобретения — являемся «природой» в такой же степени, как кролик или дуб. Мы наполняем природу таким большим смыслом и праведностью, что забываем, что она не заботится о нас; мы просто вид, играющий в экосистему. Я думаю, что идея о том, что планета не является ни злом, ни добром, а скорее безразличной скалой в космосе, просачивается почти во все, что я делаю.

Кадр из фильма Eternal September , HD-видео, 18:11 мин, 2016 г.

LC: Я хочу спросить вас о некоторых вещах, которые часто встречаются в вашей работе. Например, я заметил, что одна постоянная тема — это вода (она появляется в качестве главного действующего лица в Eternal September , но также сильно присутствует в большинстве ваших других работ, таких как Sandy Mouth , Let Me Speak to Driver и др.). Вы можете рассказать мне об этом поподробнее?

RS: Вода — это универсальный соединитель и необходимость для жизни, но она также отлично работает как метафора взаимодействия в обществе.Вот почему я думаю, что мы все еще (хотя, может быть, меньше, чем раньше) говорим такие вещи, как «серфинг в Интернете», и, возможно, почему многие незаконные действия в Интернете сопровождаются словом «пират». 71% территории планеты состоит из воды, а 60% человеческого тела — это вода. Вода используется для охлаждения серверов, которые подключают наши устройства по всей Земле, но капля воды в неправильном месте также может уничтожить практически любое устройство. Лично я вырос рядом с океаном и очень люблю его, но мне также страшно плавать в открытой воде.Я помню, что острова вокруг меня — это вершины гор в огромной невидимой долине, и я просто плыву на сотни метров над землей, а мириады существ подо мной ждут, чтобы затащить меня в глубину.

LC: Как насчет повторяющегося изображения «экрана на экране», которое создает эффект отражения?

RS: Прямо сейчас у меня в комнате четыре экрана, на самом деле пять, если включить проектор, и все они каким-то образом связаны друг с другом.Это то, что настолько повсеместно в повседневной жизни, что трудно не включить в какую-либо роль. Экраны функционируют как порталы в другие миры, и я думаю, что их можно использовать, чтобы одновременно подчеркнуть, что зритель смотрит на экран внутри экрана, и забыть, что то, что они видят, на самом деле происходит на экране. Я также пытаюсь использовать экраны как проводники памяти или как голос из другого места; своего рода призрачный канал. Иногда они просто полезны как средство для предоставления контекста или изложения.

Кадр из фильма Позвольте мне поговорить с водителем, видео HD, 29:56 мин, 2019 г.

LC: Часто зритель переживает произведение через повествование от первого лица: через глаза персонажа. Точка зрения, которая также в отношении среды произведения явно ссылается на видеоигры. Можете ли вы сказать мне, почему вы предпочитаете эту перспективу и чего вы хотите добиться с ее помощью?

RS: Мое использование POV стало естественным способом ориентироваться в повествовании.В программном обеспечении, которое я использую, пользователь всегда перемещается от первого лица, поэтому для меня естественно думать об этих средах таким образом.

Однако я всегда стараюсь представить, кто стоит за камерой и какова их роль в работе. В Eternal September, я подчеркиваю угол обзора, открывая и закрывая веки, а в Tannhäuser Gate, есть капли воды, стекающие по экрану, указывающие на наличие стеклянного барьера или линзы между наблюдателем и воспринимаемой средой.В « Let Me Speak To The Driver», «» камера прыгает вперед и назад между первым и третьим лицом, но когда мы находимся внутри POV главного героя, на экране появляются пятна и отпечатки пальцев. Я не играл в видеоигры с подросткового возраста, но думаю, что видеоигры от первого лица нацелены на такое же погружение, как и я; за счет того же использования перспективы.

Кадр из фильма Позвольте мне поговорить с водителем, видео HD, 29:56 мин, 2019 г.

LC: Каков процесс создания таких технически подкованных видео? Вы вообще пишете сценарий своей работы?

RS: Я бы сказал, что ни один из них не написан в классическом смысле слова, но я делаю много заметок и быстро зарисовываю сцены на бумаге, отправляю ее и конверты.У меня также есть работающий текстовый файл, в который я копирую и вставляю вещи, относящиеся к проекту, над которым я работаю. Каждая работа представляет собой скорее визуальную и текстовую интеллектуальную карту, чем четко составленное повествование. Это похоже на технику построения мира, используемую в области фэнтези или научной фантастики: вы создаете набор границ и правил для мира, в котором хотите создать свою историю, а затем видите, что в нем происходит.

Это своего рода глупый способ работы, поскольку он очень неэффективен, и в конечном итоге я отбрасываю много работы в процессе редактирования.Мне бы очень хотелось написать четкий сценарий и придерживаться его, но я также думаю, что в конечном итоге вырвал бы волосы, если бы не было места для импровизации. Особенно, если это проект, на создание которого может уйти год; вы легко чувствуете себя винтиком в собственном механизме.

Каждый проект также включает в себя много работы на местах, потому что мне нужно сканировать среды и ресурсы. Эти экскурсии сами по себе становятся своего рода упражнением по картированию разума, где я пытаюсь представить, какие ресурсы или реквизиты мне нужны для сеттинга и какая история может происходить в этом сеттинге.Это немного похоже на то, как выделить кусок реальности, а затем вырезать и склеить его с другим фрагментом.

В последнее время, вместо того, чтобы сканировать окружающую среду, я снимал это на видео. Позже я манипулирую отснятым материалом с помощью редактирования, аудиозаписи и 3D-композиций. Это позволяет мне привносить в работу непредсказуемость, импровизировать на месте и вовлекать людей и ситуации, находящиеся вне моего контроля. Я впервые попробовал это в видео SandyMouth, , где кадры отпуска из дня, проведенного на пляже с друзьями на пляже в стиле буги-вуги, позже превращены в короткометражный фильм об обнаружении выброшенного на берег кита.Я сканировал кита ранее летом в Гётеборгском музее естествознания без особой цели. Но после нескольких недель брожения в моей голове, он нашел свое место на этом пляже.

LC: Я люблю Позвольте мне поговорить с водителем , где главный герой постоянно просыпается в той же постапокалиптической среде. Не совсем ясно, сон ли это, реальность ли, контролирует ли он свое окружение или кто-то другой. Его многочисленные «пробуждения» искажают любое ощущение временности.Когда мы в последний раз говорили, вы упомянули вдохновение, которое вы нашли в фильме « Stalker » Тарковского для этой конкретной работы.

RS: Название действует как намек на беспомощность главного героя и, возможно, как мантра, эхом разносящаяся в его голове. Контролирует ли он свое окружение или время, которое он в нем проводит? Из-за его встреч с различными двойниками подразумевается, что он мог быть просто звеном в цепи. Что он повторяет некий бесконечный узор, как виниловая пластинка, застрявшая в той же канавке.Один из аспектов Stalker , который сознательно упоминается в Let Me Speak To The Driver , заключается в том, как главные герои перемещаются в своей среде посредством своего рода чтения или декодирования ландшафта. Сталкер бросает металлические болты, чтобы выяснить, какой путь безопасен, в то время как мой одетый в хазмат мужчина прикасается к окружающей среде и почти чувственно ласкает ее, чтобы понять или почувствовать себя ближе к ней, хотя в некотором смысле она явно опасна и токсична. Я попытался передать то же почти духовное чувство, которое преследователь испытывает к Зоне в сцене, где хазмат приносит себя в жертву, вдыхая токсичные пары, исходящие из земли.После этого он как бы становится одержим самим пейзажем, и повествование становится более разрозненным и сюрреалистичным.

LC: Я полагаю, что это происходит тогда, когда ощущение темпоральности искажается, и логика линейности полностью растворяется в научной фантастике.

RS: В большинстве своих работ с видео я пытаюсь вызвать искажение времени. Иногда главный герой буквально прыгает через пространство и время, как будто он каким-то образом оторвался от своей временной шкалы.

В видеороликах используется много анахронизмов: в наши дни появляются древние артефакты или внутри древнего храма появляется супермаркет. Часто объекты действуют как привязки к прошлому и будущему, они сохраняются во времени, и показано, что они знали много разных рук и использований.

В The Culture Bunker главный герой натыкается на археологические раскопки с могилами неизвестного происхождения. Когда он пытается разобраться в этом и задокументировать окружающую обстановку, его толчки каким-то образом пробуждают или активируют прошлых призраков.Снимая это, я только что прочитал статью об обнаружении останков Ричарда Третьего под автостоянкой в Лестере. Это заставило меня подумать об этом почти мифическом короле, похороненном всего в нескольких метрах под колесами какого-то Ford Focus, и о том, как смесь священного и обыденного сочится повсюду вокруг нас.

Кадр из фильма The Culture Bunker , HD video, 10:15, 2019

‍
LC: Интересно, как вы упоминаете, что священное и мирское переплетаются повсюду вокруг нас.Вы часто создаете собрания в своей среде, которые очень напоминают мне священные объекты, но все они сделаны из обломков или найденных объектов — ничего драгоценного на вид — просто вещи, тщательно скрепленные вместе. Если вы решите перенести их в реальность, они могут функционировать как настоящие скульптуры в выставочном пространстве. Вы когда-нибудь испытывали желание сделать их реальными вещами?

Кадр из фильма Позвольте мне поговорить с водителем, видео HD, 29:56 мин, 2019 г.

‍ RS: Меня часто спрашивают, почему я не создаю эти скульптуры «по-настоящему», вернее, сказал, что я должен сделать их, имея в виду, что они каким-то образом получат ценность благодаря физическому присутствию.Я считаю себя не скульптором в этом смысле, а скорее создателем реквизита. Я делаю вещи только по доверенности. Все, что сделано для декораций видео, сделано через фильтр World-Building; Я не создатель этих артефактов. Персонаж, который живет в этом выдуманном мире. Для меня важно, чтобы объекты населяли свой пейзаж, чтобы у них было прошлое и патина. Скульптуры чаще всего строятся не только для эстетического удовлетворения. Некоторые из них работают как декоративные машины, некоторые имеют ритуальное / религиозное применение, а некоторые просто служат ориентирами или маркерами трейлеров.Часто я использую повседневный предмет (тележку для покупок или кошачье дерево) и пытаюсь представить, как его можно изменить с помощью мыслей человека, не знакомого с его первоначальным использованием. Я поиграл с идеей сделать опоры физическими в Let Me Speak To The Driver — где некоторые из них появляются с интервалами, как то, что похоже на напечатанные на 3D-принтере версии оригиналов. Это означало почти мета-комментарий к предполагаемой реальности самих вещей: действительно ли они существуют как физическая материя? В этих сценах я также добавил звуки толпы на задний план, чтобы обозначить некую связь с внешним «реальным» миром.Албан Шелберт (звукорежиссер, с которым я иногда работаю) сочинил набор жутких джинглов, которые, как мы надеялись, поместят эти объекты в почти коммерческий контекст, как маленькие коллекционные предметы. Однако, хотя я думаю, что реквизит мог бы функционировать отдельно от окружающей среды (лишенный своей повествовательной цели и преобразованный в скульптуры), я действительно не хочу делать эти объекты реальными. Для меня они уже существуют в реальной жизни, они просто занимают виртуальное и, в некотором смысле, воображаемое пространство, доступ к которому можно получить только через волшебный портал экрана.На самом деле это не место, но это реально.

Кадр из Tannhäuser Gate (сейчас уже нет) , HD-видео, 17:18, 2017 г.

LC: Что нужно читать (или смотреть), чтобы получить более глубокий доступ к своей работе?

RS: Первым триггером для Let Me Speak To The Driver было эссе Элиота Вайнбергера, которое натолкнуло меня на идею антропологической экспедиции по искусственному ландшафту. Мне очень нравится его странная смесь информативной прозы.Я также читал много ужасов начала века, посвященных природе, Алджернона Блэквуда, Артура Мейчена и Х.П. Лавкрафт. Первые сезоны телешоу Lost также были своего рода вдохновением. Я действительно ценил то, что сценаристы так не хотели закрывать публику, а вместо этого продолжали вводить новые тайны. Еще одно большое влияние — роман « Cosmos » Витольда Гомбровича и то, как главный герой отчаянно пытается сформировать связный узор из, казалось бы, случайных событий.Также Томас Пинчон, Уильям Гибсон, Джулиан Коуп, Стюарт Ли, Крис Моррис и многие другие так или иначе проникают в работу, как и несколько книг Марка Фишера. Но в настоящее время я читаю рассказ о путешествии художника и оккультиста Ителл Колкухун под названием « Живые камни », который касается ее времени, проведенного в Корнуолле, и множества слоев мифов и легенд.

Анкона — Сен-Север-де-Рустан — 9 способов добраться на поезде, самолете и автобусе

Отрицательный тест на COVID-19 выдан не позднее, чем за 3 дня до прибытия

Это не относится к прибывшим из : Болгария, Эстония, Латвия, Литва и Румыния

Отрицательный результат теста на COVID-19, выданный не позднее, чем за 1 день до прибытия

Это относится к прибывшим из Болгарии, Эстонии, Латвии, Литвы и Румынии

7-дневное обязательное самообслуживание -quarantine

Это не относится к прибывшим из: Шенгенской зоны ЕС (страны ЕС, Исландия, Лихтенштейн, Норвегия и Швейцария), Афганистана, Андорры, Аргентины, Австралии, Бахрейна, Бразилии, Брунея, Канады, Чили, Коморских островов , Коста-Рика, Куба, Грузия, Гонконг, Иран, Иордания, Кувейт, Ливан, Монако, Новая Зеландия, Пакистан, Катар, Россия, Руанда, Сан-Марино, Саудовская Аравия, Сенегал, Южная Корея, Суринам, Тайвань, Турция, Соединенные Штаты Арабские Эмираты, Уругвай, Вануату и Ватикан

Обязательный 10-дневный карантин

Это касается прибывающих из Афганистана, Бразилии, Коста-Рики, Кубы, Грузии, Ирана, Пакистана, России, Суринама и Турции

Путешественники с сертификатом о вакцинации освобождаются от предоставления отрицательный тест на COVID-19

Это относится к прибывшим из Шенгенской зоны ЕС (страны ЕС, Исландия, Лихтенштейн, Норвегия и Швейцария), Андорры, Аргентины, Австралии, Бахрейна, Брунея, Канады, Чили, Коморских островов, Гонконга, Иордания, Кувейт, Ливан, Монако, Новая Зеландия, Катар, Руанда, Сан-Марино, Саудовская Аравия, Сенегал, Южная Корея, Тайвань, Объединенные Арабские Эмираты, Уругвай, Вануату и Ватикан

Путешественники, вылечившиеся от COVID-19 в последние 6 месяцев освобождаются от предоставления отрицательного результата теста на COVID-19 и могут обойти обязательный карантин по прибытии (требуется сертификат)
Путешественники с сертификатом о вакцинации освобождаются от предоставления отрицательного результата. пройти тест на COVID-19 и можно обойти обязательный карантин по прибытии
Требуется сертификат об освобождении от международного перемещения для поездки

Это не относится к прибывшим из: Шенгенской зоны ЕС (страны ЕС, Исландия, Лихтенштейн, Норвегия и Швейцария) ), Андорра, Аргентина, Австралия, Бахрейн, Бруней, Канада, Чили, Коморские Острова, Иордания, Кувейт, Ливан, Монако, Новая Зеландия, Катар, Руанда, Сан-Марино, Саудовская Аравия, Сенегал, Южная Корея, Тайвань, Объединенные Арабские Эмираты, Уругвай, Вануату и Ватикан

Требуется медицинская декларация

Это касается прибывающих из всех стран без исключений

Показать меньше

Как добраться до Рустана в Макати на автобусе или поезде

Общественный транспорт до Rustan в Makati City

Не знаете, как доехать до Rustan в Makati City, Филиппины? Moovit поможет вам найти лучший способ добраться до Rustan от ближайшей остановки общественного транспорта, используя пошаговые инструкции.

Moovit предоставляет бесплатные карты и маршруты в реальном времени, которые помогут вам сориентироваться в вашем городе. Открывайте расписания, поездки, расписание и узнавайте, сколько займет дорога до Рустань с учетом данных Реального Времени.

Ищете остановку или станцию около Rustan? Проверьте список ближайших остановок к пункту назначения: Перекресток Рокфеллера и Эдисона; Skyway; Сенатор Гил Пуят авеню; А.Arnaiz Ave / Batangas; Buendia Pnr; Улица М. Дела Крус / улица Эсгерра, перекресток; Вашингтон / перекресток Э. Хачинто; Gil Puyat Lrt.

Вы можете доехать до Rustan на автобусе или поезде. У этих линий и маршрутов есть остановки поблизости: Автобус: АВТОБУС, JEEP Поезд: LRT 1, PNR MC

Хотите узнать, есть ли другой маршрут, который приведет вас туда раньше? Moovit поможет вам найти альтернативные маршруты или время.Получите инструкции, как легко доехать до или от Rustan с помощью приложения или сайте Moovit.

С нами добраться до Рустан проще простого, поэтому более 930 млн. Пользователей, включая жителей Макати, доверяют Moovit как лучшему транспортному приложению. Вам не нужно загружать отдельное приложение для автобуса или поезд. Moovit — ваше универсальное транспортное приложение, которое поможет вам узнать самое лучшее из доступных расписаний автобусов и поездов.

Чтобы узнать цены на автобус и поезд, стоимость проезда и проезд до Рустана, пожалуйста, проверьте приложение Moovit.

Die Konservierung-Restaurierung des Schaukelpferdes «Rustan» из музея Salzburger Spielzeug (Дата 1860; 110 x 45 x 83 см)

Die vorliegende Arbeit beschäftigt sich mit dem Schaukelpferd «Rustanger Spielze de Salzburger». Das Objekt stammt ursprünglich aus dem Wiener Umkreis und wurde 1860 von einem unbekannten Hersteller gefertigt. Schwerpunkte der Arbeit lagen auf den Untersuchungen der verschiedenen Materialien (Holz, Textil, Leder, Papier, Metall, Glas, Rosshaar) und auf den praktischen Maßnahmen.Anhand der Ergebnisse der Untersuchungen konnten die Konstruktionselemente und der Fassungsaufbau analysiert werden. Dabei zeigte sich, dass das Schaukelpferd eine Erst- und eine Überfassung (nach 1938) aufweist. Der Schwerpunkt der praktischen Arbeit lag in der Durchführung konservatorischer Maßnahmen, wie der Rissvernähung und Rissverklebung an Fehlstellen des groben Sackleinens, Entfernung der Oberflächenverschmutzunges, Fr.Abschließend wurde eine zurückhaltende Retusche durchgeführt. Разновидности материалов, использование и ремонт: Консервация и реставрация лошадки-качалки «Рустан» из Музея игрушек в Зальцбурге (Дата 1860; 110 x 45 x 83 см). Представленный документ посвящен консервации лошадки-качалки «Rustan». из Музея игрушек в Зальцбурге. Предмет происходит из окрестностей Вены и был изготовлен в 1860 году неизвестным производителем. Проводится анализ большого количества различных используемых материалов (дерево, текстиль, кожа, бумага, металл, стекло, конский волос), а также изучаются и применяются варианты лечения.Внимательное изучение и результаты анализов подтвердили детали конструкции лошадки-качалки и привели к идентификации слоев краски. Кроме того, были обнаружены два разных слоя краски, а это означает, что первоначальный первоначальный слой краски был перекрашен позже. Была разработана и применена методика обработки, такая как зашивание и исправление разрывов, заполнение трещин в холсте, удаление поверхностных загрязнений, консервация металлических частей, а также укрепление слоев краски, поддерживающей ткани (хлопка и газеты) и кожаные аппликации.Наконец, была произведена частичная ретушь.

Где купить | Dyson.ph

Имя	Адрес	Телефон


Демонстрационная версия Dyson

Гринбелт 5	Уровень 3, торговый центр Greenbelt 5, улица Легаспи 1228, город Макати.	(63) 917-8669027

Podium Mall	Уровень 2, Торговый центр Podium, ADB Road, Центр Ортигас, Город Пасиг.	(63) 917-8669038

SM Aura Premier	Уровень 2, SM Aura Premier, угол 26-й улицы McKinley Parkway, Taguig City.	(63) 917-8635841

Торговый центр SM Mall of Asia	Уровень 1, Северный главный торговый центр, торговый центр SM Mall of Asia, Приморский бульвар, город Пасай.	(63) 917-8635825

Продавец

Abenson Ascott BGC	Уровень 2, Абенсон Глобал Сити, 5-я авеню, угол 28-й улицы, Бонифачо Глобал-Сити, Тагуиг.

Энсонс Макати Ссылка	Макати Авеню, угол Норт Драйв, Центр Аяла, Город Макати.

Айяла Тринома	Уровень 3, торговый центр Ayala Trinoma, угол EDSA North Avenue, Кесон-Сити.	(63) 917-8669039

Century City Mall	Уровень 3, Торговый центр Century City, проспект Калаян, Бргы. Побласьон, Макати Сити.	(63) 917-8635837

Chimes Boutique Davao	Уровень 3, Специализированный магазин «Куранты».Улица Губернатора продаж, район Побласьон, город Давао, Давао-дель-Сур.

Greenhills Promenade Mall	Уровень 1, Променад Гринхиллс, Миссури-стрит, Гринхиллс, Сан-Хуан.

Аяла Себу Рустана	Уровень 3, универмаг Рустана, центр Аяла, проспект Бохол, город Себу.

Макати Рустана	Уровень 4, Универмаг Рустана, Центр Аяла, проспект Аяла, город Макати.

Шангри-ла Рустана	Уровень 3, универмаг Рустана, торговый центр Shangri-la Plaza, бульвар Шоу на углу EDSA, город Мандалуйонг.

SM Appliance Megamall	Цокольный этаж, SM Megamall Building B, угол EDSA J. Vargas Avenue, Mandaluyong City.

Устройство SM Rockwell	P1, Торговый центр Электростанции, Роквелл Центр, улица Амапола, город Макати.

True Value Центр города Алабанг	Верхний первый этаж, крыло расширения, центр города Алабанг, город Мунтинлупа.

Центральный блок True Value Ayala	Уровень 3, Центральный блок торговых центров Аяла.Угол V. Padriga, улица Jose Maria Del Mar, Cebu I.T. Бизнес-парк, Апас, Себу Сити.

True Value Robinsons Magnolia	Уровень 3, «Робинсоны Магнолия», угол бульвара Аврора, улица Дона Хемеди, Кесон-Сити.

Силовая установка True Value Rockwell	Уровень зала, торговый центр электростанции, Роквелл-центр, Роквелл-драйв, Макати-Сити.

True Value Шангри-ла	Уровень 6, Торговый центр Шангри-ла Плаза, бульвар Шоу, город Мандалуйонг.

Салон красоты

SM Store Makati Beauty Section	Верхний этаж, SM Makati, Hotel Drive, Makati City.

Интернет-магазин

Лазада
Shopee
ВПИ
Залора
м-н СМ

Электроимпульсная стимуляция культивируемых клеток скелетных мышц человека как модель упражнений in vitro

Аннотация

Предпосылки и цели

Физические упражнения вызывают существенные адаптивные реакции в скелетных мышцах и играют центральную роль в здоровом образе жизни.Поскольку упражнения вызывают основные системные реакции, лежащие в основе клеточные механизмы трудно изучать in vivo. Поэтому было желательно разработать модель in vitro , которая напоминала бы тренировку на культивируемых мышечных трубках человека.

Методы

Электроимпульсная стимуляция (EPS) применялась к прикрепленным мышечным трубкам человека. Определяли клеточное содержание АТФ, фосфокреатина (PCr) и лактата. Метаболизм глюкозы и олеиновой кислоты изучали с использованием радиоактивно меченных субстратов, а экспрессию генов анализировали с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени.Содержание и функцию митохондрий измеряли путем визуализации в реальном времени и определения активности цитрат-синтазы, соответственно. Экспрессию белка оценивали с помощью электрофореза и иммуноблоттинга.

Результаты

Высокочастотный острый ЭПС увеличивал поглощение дезоксиглюкозы и продукцию лактата, в то время как содержание в клетках как АТФ, так и ПЦр снижалось. Хронический низкочастотный ЭПС увеличивает окислительную способность культивируемых миотрубок за счет увеличения метаболизма глюкозы (поглощения и окисления) и полного окисления жирных кислот.Уровень экспрессии мРНК комплекса пируватдегидрогеназы 4 (PDK4) был значительно увеличен в клетках, обработанных EPS, в то время как экспрессия мРНК интерлейкина 6 (IL-6), цитохрома C и карнитинпальмитоилтрансферазы b (CPT1b) также имела тенденцию к увеличению. Интенсивность MitoTracker®Red FM была удвоена после 48 часов хронической низкочастотной ЭПС. Экспрессия белка маркера типа медленных волокон (MHCI) была увеличена в клетках, обработанных EPS.

Выводы

Наши результаты предполагают, что in vitro EPS (острые, частые, а также хронические, редко встречающиеся) мышечных трубок человека могут быть использованы для изучения эффектов физических упражнений.

Образец цитирования: Николич Н., Скарет Бакке С., Транхейм Касе Е., Рудберг I, Фло Халле I, Рустан А.С. и др. (2012) Электроимпульсная стимуляция культивируемых клеток скелетных мышц человека как модель упражнений In vitro . PLoS ONE 7 (3): e33203. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0033203

Редактор: Мария Моран, Больница Instituto de Investigación 12 октября, Испания

Поступила: 10 мая 2011 г .; Одобрена: 13 февраля 2012 г .; Опубликован: 22 марта 2012 г.

Авторские права: © 2012 Nikolić et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа финансировалась Университетом Осло, Университетским колледжем Осло, Норвежским фондом диабета, Медицинским фондом Фрейи Шоколаде Фабрикс и Фондом Андерса Яре. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Физическая подготовка ведет к обширной адаптации скелетных мышц [1] — [4]. Регулярная физическая активность играет центральную роль как в профилактике, так и в улучшении многих хронических заболеваний, улучшении образа жизни и увеличении продолжительности жизни [2]. Однако молекулярные механизмы, лежащие в основе этих адаптаций, все еще плохо изучены, что подчеркивает необходимость модели клеточной культуры, напоминающей обучение ex vivo .

Активация мышечных волокон двигательными нейронами может быть заменена электростимуляцией электрических импульсов (ЭПС) дифференцированных клеток скелетных мышц (миотрубок) в культуре [5], [6]. Метаболические и генетические адаптации, вызываемые EPS in vitro , ранее были описаны в клетках C2C12 мыши [7] — [9], в клетках L6 [10] и в первичных клетках скелетных мышц крыс [11]. In vivo, немедленные эффекты ЭПС, такие как активация захвата глюкозы и гликогенолиза [12], можно четко отличить от более глубоких изменений метаболических и транскрипционных фенотипов мышц, возникающих в результате хронически повышенной сократительной активности, вызванной хронической низкочастотный ЭПС [12].Аналогичным образом, острые изменения в скелетных мышцах после одной тренировки in vivo значительно отличаются от тех, которые наблюдаются после регулярных тренировок, что, очевидно, обеспечивает большинство положительных эффектов для здоровья от упражнений in vivo [2], [2], [2] 13].

Адаптация метаболических свойств в скелетных мышцах после упражнений отражается как повышенным содержанием митохондрий [14], [15], так и улучшенной окислительной способностью [4], [16], [17]. Было высказано предположение, что несколько сигнальных путей участвуют в стимуляции митохондриального биогенеза в сокращающейся мышце [18] — [20].Также было показано, что упражнения улучшают синтез липидов и окисление липидов [20] — [23]. Как следствие этих метаболических адаптаций, тренированные мышцы потребляют больше необходимой энергии из липидов и меньше из углеводов по сравнению с нетренированными мышцами во время субмаксимальной работы (т.е. работы, выполняемой ниже максимальной способности использования кислорода) [24]. Помимо жирных кислот, тренированные волокна импортируют и используют больше глюкозы, чем нетренированные мышечные волокна [25], [26]. Транспортеры глюкозы 1 и 4 (GLUT1 и GLUT4) являются основными переносчиками глюкозы в клеточной мембране клеток скелетных мышц [27], а регулярная физическая активность улучшает способность инсулина стимулировать поглощение глюкозы в состоянии покоя [28] — [30]. ].

Пластичность скелетных мышц в ответ на упражнения на выносливость выходит за рамки метаболических изменений. В скелетных мышцах человека можно выделить три основных типа мышечных волокон: тип I (окислительные, медленные), IIa (промежуточные) и IIx (гликолитические, быстро сокращающиеся) на основе гистохимических, функциональных и биохимических свойств [31]. Волокна типа I характеризуются более высоким содержанием митохондрий и повышенным транспортом глюкозы по сравнению с волокнами типа II, а чувствительность к инсулину всего тела положительно коррелирует с долей медленно сокращающихся окислительных волокон у людей [32].Преобразование мышечного фенотипа типа II в тип I было показано у животных [33], но мало доказательств того, что этот тип перехода действительно происходит у взрослых людей [15], [24]. Было показано, что хронический низкочастотный EPS in vivo приводит к превращению быстро сокращающихся гликолитических мышечных волокон в окислительные волокна медленного типа [12]. Более того, скелетные мышцы недавно были идентифицированы как орган, который вырабатывает и высвобождает несколько цитокинов, которые называются «миокинами», среди которых есть интерлейкины 6, 8 и 5 (IL-6, IL-8 и IL-5) [34] .Было продемонстрировано, что концентрация IL-6 в плазме увеличивается во время мышечной нагрузки [35], [36], а IL-6, по-видимому, оказывает положительное влияние на метаболизм глюкозы в скелетных мышцах [37], [38]. Эти данные свидетельствуют о том, что физические упражнения также влияют на иммунную систему; однако последствия этого для метаболических реакций еще не изучены.

Ранее мы сообщали о влиянии острой электростимуляции на метаболизм глюкозы в культивируемых клетках скелетных мышц человека как при высоких, так и при низких концентрациях глюкозы [39].В последние годы увеличилось количество сообщений о нескольких моделях EPS, применяемых к культивируемым клеткам скелетных мышц, что свидетельствует о растущем интересе к созданию метода, который позволил бы изучать клеточные механизмы упражнений в контролируемых условиях in vitro [6] — [9], [11], [40]. Однако, насколько нам известно, модель EPS не применялась к первичным клеткам скелетных мышц человека. Системы клеточных культур, полученные из биопсии мышц, использовались для изучения метаболизма глюкозы и липидов в течение последних 30 лет.Дифференцированные первичные мышечные трубки человека представляют собой наилучшую доступную альтернативную систему для интактных скелетных мышц человека. В отличие от систем культивирования грызунов, они обладают наиболее подходящей генетической базой для изучения болезней человека, а также демонстрируют морфологические, метаболические и биохимические свойства скелетных мышц взрослых [41], [42].

В настоящем исследовании мы стремились разработать модель in vitro упражнений на культивируемых клетках скелетных мышц человека, уделяя основное внимание метаболическим эффектам хронических низкочастотных ЭПС.Эта модель может быть использована для изучения адаптивных ответов клеток скелетных мышц на различные типы сократительной активности, применяемые с помощью электрической импульсной стимуляции (EPS).

Материалы и методы

Материалы

Среда Игла, модифицированная Дульбекко (DMEM-Glutamax ™), термоинактивированная фетальная телячья сыворотка (FCS), пенициллин / стрептомицин (P / S) и амфотерицин B были приобретены у Gibco (Gibco, Life Technologies Paisley, UK). БСА (бычий сывороточный альбумин) (по существу не содержит жирных кислот), L-карнитин и фосфатно-солевой буфер Дульбекко (DPBS; с Mg ²⁺ и Ca ²⁺), олеиновая кислота, гель внеклеточного матрикса (ECM) и HEPES были получены от Sigma (Сент-Луис, Миссури).Ultroser G был приобретен у Ciphergen (Cergy-Saint-Christophe, Франция), а инсулин (Actrapid®) — у NovoNordisk (Bagvaerd, Дания). [1- ¹⁴ C] олеиновая кислота (55 мКи / ммоль) и D- [¹⁴ C (U)] глюкоза (5 мКи / ммоль) были получены от NEN Radiochemicals, PerkinElmer (Бостон, Массачусетс). [³ H] дезоксиглюкоза (10 Ки / ммоль) была от American Radiolabeled Chemicals Inc. (Сент-Луис, Миссури). Ecoscint A сцинтилляционный раствор был от National Diagnostics (Hessle, England, UK). Стеклянные нижние пластины были от MatTek (Ашленд, Массачусетс).Реагены для анализа белков были закуплены у BioRad (Копенгаген, Дания). Антитела Phospho-Akt (Ser473) и Akt были получены от Cell Signaling Technology (Беверли, Массачусетс), коктейльные антитела OXPHOS были получены от MitoSciences (Юджин, Орегон), а антитела Anti-Myosin, slow muscle (MAB1628) были от Millipore (Биллерика, Массачусетс). . MitoTracker®Red FM и Hoechst 33258 были получены от Molecular Probes, Invitrogen (Карлсбад, Калифорния). NuPAGE® 4–12% (мас. / Об.) Bis-Tris Gel, 1 мм × 12 лунок, был от Invitrogen (Карлсбад, Калифорния). Набор для анализа активности цитрат-синтазы был от Sigma-Aldrich® (St.Луис, Миссури). Набор для определения цитотоксичности Plus (LDH) был от Roche Applied Science, Мангейм, Германия. Праймеры для ПЦР в реальном времени TaqMan были предоставлены Invitrogen (Карлсбад, Калифорния). Реагенты набора для обратной транскрипции SYBR green и TaqMan были получены от Applied Biosystems (Warrington, UK). Набор для выделения общей РНК Agilent был приобретен у Agilent Technologies (Санта-Клара, Калифорния). Все использованные химикаты были стандартного коммерческого качества высокой чистоты.

Заявление об этике

Биопсии были получены с информированного письменного согласия и одобрения Национального комитета по этике исследований (Осло, Норвегия).Исследование, проведенное в этом исследовании, было одобрено Национальным комитетом по этике исследований (Осло, Норвегия) как часть более крупного проекта.

Культуры клеток скелетных мышц человека

Банк клеток-сателлитов был создан из образцов биопсии мышц Musculus obliquus internus abdominis двенадцати здоровых добровольцев (10 женщин, 2 мужчин), возрастной диапазон 34–70 лет (50,9 ± 9 лет), индекс массы тела ( ИМТ) диапазон 19,6–29,7 кг / м ² (23,9 ± 0,9 кг / м ²), диапазон глюкозы натощак 4.9–6,9 мМ (5,2 ± 0,2 мМ), липиды плазмы и артериальное давление в пределах нормы. Не все доноры использовались в каждом эксперименте. Культуры мышечных клеток, свободные от фибробластов, были созданы по методу Генри и др. [42]. Вкратце, мышечная ткань была рассечена в среде Хэма F-10 при 4 ° C и диссоциирована тремя последовательными обработками 0,05% трипсином / ЭДТА, и сателлитные клетки ресуспендировали в скелетных мышцах DMEM-Glutamax ^TM с 2% FCS, 2%. Ultroser G, 50 Ед / мл пенициллина, 50 мкг / мл стрептомицина, 1.25 мкг / мл амфотерицина B и без добавления инсулина. Клетки выращивали в культуральных лунках или колбах, покрытых гелем внеклеточного матрикса [43]. Через 1-2 недели, при ~ 80% слияния, ростовую среду заменяли на DMEM-Glutamax ^TM с 2% FCS, 50 ед. / Мл пенициллина, 50 мкг / мл стрептомицина, 1,25 мкг / мл амфотерицина B и 25 пМ инсулина. для индукции дифференцировки миобластов в многоядерные мышечные трубки. Клетки культивировали в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ при 37 ° C, среду меняли каждые 2–3 дня.Все культуры миотрубок использовали для анализа на 8 или 9 день после начала дифференцировки.

Электроимпульсная стимуляция мышечных клеток

Многоядерные миотрубки, выращенные в 6-луночных планшетах, покрытых ECM, стимулировали с помощью угольных электродов либо с помощью острого высокочастотного EPS (последовательности биполярных импульсов 100 Гц в течение 200 мс, подаваемых каждые 5 ^-й секунды, 30 В, в течение 5-ти секунд). –60 мин), или применяя хронические низкочастотные ЭПС (одиночные биполярные импульсы длительностью 2 мс, с 30 В и 1 Гц непрерывно в течение последних 24 или 48 часов периода дифференциации).Среду культивирования меняли каждые 12 ^ч ч при хронической низкочастотной ЭПС. Электрические импульсы генерировались мышечным стимулятором, созданным в лаборатории электроники Института химии Университета Осло.

Содержание АТФ, PCr и лактата

Мышечные трубки предварительно инкубировали в течение 1 ч (37 ° C, 5% CO ₂) с DMEM-Glutamax ^TM. Затем среду меняли на свежую DMEM-Glutamax ^TM и применяли острый высокочастотный EPS на 5–60 мин.После стимуляции клетки немедленно помещали на лед, среду удаляли и клетки трижды промывали ледяным фосфатно-солевым буфером (PBS) перед сбором в 200 мкл ледяной хлорной кислоты (3 M). . Анализы содержания АТФ, PCr и лактата были выполнены в Институте экспериментальных медицинских исследований, Университетская больница Уллевол, Осло. Клетки анализировали на уровни АТФ и PCr с помощью люминесцентной спектрометрии, а содержание лактата в клетках анализировали с помощью флуоресцентной спектрометрии, как описано Lowry et al.[44].

Измерение лактатдегидрогеназы

( LDH ) в культуральной среде из миотрубок, обработанных хроническим низкочастотным EPS

Цитотоксический эффект EPS определяли с помощью колориметрического анализа, основанного на измерении активности лактатдегидрогеназы (LDH) в супернатанте с использованием набора Cytotoxicity Detection Kit ^PLUS (LDH) (Roche Applied Science, Мангейм, Германия). Многоядерные миотрубки, выращенные в 6-луночных планшетах, покрытых ECM, стимулировали с помощью угольных электродов, непрерывно применяя ЭПС с низкой частотой в течение последних 24 или 48 часов дифференцировки, и активность ЛДГ в супернатанте определяли в соответствии с протоколом поставщика. .Клетки, лизированные Triton-X-100, использовали для определения максимальных значений.

Метаболизм глюкозы

Начальные эксперименты с частотно-зависимым поглощением дезоксиглюкозы: Мышечные трубки голодали в течение 60 минут в бессывороточной среде DMEM-Glutamax ^TM (5,5 мМ глюкозы) в инкубаторе с 5% CO ₂ при 37 ° C. Затем среду меняли на бессывороточную среду DMEM-Glutamax ^TM с [³ H] дезоксиглюкозой (1 мкКи / мл) +/- цитохалазин B (20 мкМ), и применяли острый EPS в течение первых 15 мин. 60-минутного периода поглощения дезоксиглюкозы с использованием частот от 2 до 10 Гц. Поглощение дезоксиглюкозы при острой высокочастотной ЭПС: Мышечные трубки голодали в течение 60 минут в бессывороточной среде DMEM-Glutamax ^TM (5,5 мМ глюкозы) в инкубаторе с 5% CO ₂ при 37 ° C. Затем среду заменили на бессывороточную среду DMEM-Glutamax ^TM с [³ H] дезоксиглюкозой (1 мкКи / мл) +/- инсулин (100 нМ) и +/- цитохалазин B (20 мкМ), и острый, высокочастотный ЭПС применялся в течение 5–60 мин. Поглощение дезоксиглюкозы после хронической низкочастотной ЭПС: Хроническая низкочастотная ЭПС применялась к мышечным трубкам непрерывно в течение последних 24–48 часов периода дифференцировки.После завершения ЭПС мышечные трубки в течение 60 минут подвергали голоданию в бессывороточной среде DMEM-Glutamax ^TM (5,5 мМ глюкозы) в инкубаторе с 5% CO ₂ при 37 ° C, а затем подвергали воздействию [³ H] дезоксиглюкоза (1 мкКи / мл) +/- инсулин (100 нМ) и +/- цитохалазин B (20 мкМ). Поглощение дезоксиглюкозы измеряли в течение 60 минут как для острого высокочастотного ЭПС, так и для хронического низкочастотного ЭПС. После окончания поглощения клетки немедленно помещали на лед и трижды промывали ледяным PBS, лизировали 0.05 M NaOH, и радиоактивность подсчитывали методом жидкостной сцинтилляции. Содержание белка в каждом образце измеряли по Брэдфорду [45]. Поглощение, не опосредованное носителями, определяли в присутствии цитохалазина B и вычитали из всех представленных значений. Окисление глюкозы после хронического низкочастотного ЭПС: Хроническое низкочастотное ЭПС наносили на мышечные трубки на 24 или 48 часов. Затем мышечные трубки инкубировали с DMEM без глюкозы и D- [¹⁴ C (U)] глюкозой (2 мкКи / мл) (1 мл / лунка) в инкубаторе с 5% CO ₂ при 37 ° C.Через 2 ч 500 мкл клеточной среды переносили в герметичные колбы и 300 мкл фенилэтиламин-метанола (1 × 1, об. / Об.) Добавляли шприцем в центральную лунку, содержащую сложенную фильтровальную бумагу. Затем 100 мкл 1 М хлорной кислоты добавляли в среду через пробки с помощью шприца. Колбы помещали минимум на 2 часа при комнатной температуре для улавливания меченого CO ₂ и подсчитывали радиоактивность с помощью жидкостной сцинтилляции. Содержание белка в каждом образце измеряли согласно Брэдфорду [45].

Метаболизм жирных кислот после хронического низкочастотного EPS

Через 24–48 часов хронической низкочастотной ЭПС мышечные трубки подвергались воздействию 1 мл / лунка DPBS с добавлением HEPES (10 мМ), NaHCO ₃ (44 мкМ), [1- ¹⁴ C] олеиновая кислота (1 мкКи / мл, 0,1 мМ), 0,24 мМ БСА и 1 мМ L-карнитин в инкубаторе с 5% CO ₂ при 37 ° C. Через 2 ч 500 мкл клеточной среды переносили в герметичные колбы и 300 мкл фенилэтиламин-метанола (1 × 1, об. / Об.) Добавляли шприцем в центральную лунку, содержащую сложенную фильтровальную бумагу.Затем 100 мкл 1 М хлорной кислоты добавляли в среду через пробки с помощью шприца. Колбы помещали минимум на 2 часа при комнатной температуре для улавливания меченого CO ₂. Для измерения продуктов β-окисления (кислоторастворимые метаболиты (ASM)) аликвоты по 250 мкл клеточной среды осаждали 100 мкл 6% BSA и 1 мл 1 M хлорной кислоты. После центрифугирования (20000 г , 10 мин, 4 ° C, центрифуга Heraues Fresco21, Thermo Scientific) 250 мкл супернатанта подсчитывали жидкостной сцинтилляцией.Контроли без клеток были включены и вычтены из всех представленных значений. Клетки помещали на лед и трижды промывали ледяным PBS, лизировали 0,05 М NaOH и подсчитывали радиоактивность, связанную с клетками (СА), с помощью жидкостной сцинтилляции для определения поглощения олеиновой кислоты. Содержание белка в каждом образце измеряли по Брэдфорду [45].

Иммуноблоттинг после хронической низкочастотной ЭПС

Аликвоты 40 мкг клеточного белка из общих клеточных лизатов, приготовленных в буфере Лэммли, разделяли электрофоретически на NuPAGE® 4–12% (мас. / Об.) Bis-Tris Gel (Invitrogen) с последующим иммуноблоттингом с антителами, распознающими общую киназу Akt [протеинкиназа B (PKB)], Akt, фосфорилированный по Ser478, и белковые комплексы цепи переноса электронов (человеческий коктейль OXPHOS, содержащий антитела против субъединицы Комплекса I NDUFB8, субъединицы Комплекса II, Комплекса III субъединицы ядра 2, Комплекса IV субъединицы II и АТФ-синтазы субъединицы альфа) и миозин, медленные мышцы (MHCI).Иммунореактивные полосы визуализировали с помощью усиленной хемилюминесценции и количественно оценивали с помощью программного обеспечения Gel-Pro Analyzer (версия 2.0).

Окрашивание и живое изображение митохондрий и анализ активности ферментов после хронической низкочастотной EPS

Миотрубок культивировали в 6-луночных планшетах со стеклянным дном, покрытых ECM. Хронический низкочастотный EPS применяли к культивируемым миотрубкам в течение последних 48 часов периода дифференцировки, и, кроме того, на 8-й день дифференцировки мышечные трубки инкубировали при 37 ° C и 5% CO ₂ с MitoTracker®Red FM (100 нМ) в течение 15 минут для окрашивания митохондрий и Hoechst 33258 (2.5 мкг / мл) в течение 15 мин для окрашивания ядер и промывали между ними PBS. Автоматическое получение изображений выполняли в культуральной среде без фенолового красного с помощью платформы Olympus ScaňR (инвертированный флуоресцентный микроскоп Olympus IX81), оснащенной термостатом и инкубатором с обогащением CO ₂ для долговременной визуализации живых изображений, как описано в Hessvik et al [46 ]. Мы использовали объектив с 20-кратным увеличением, и были получены изображения в реальном времени в 25 положениях на лунку, и были исследованы 3 лунки на обработку на каждого донора. Проекция максимальной интенсивности за вычетом фона из 7 изображений, снятых в направлении z (на расстоянии 1 мкм), использовалась для обоих цветовых каналов в каждой позиции.Программное обеспечение Olympus ScaňR использовалось для автоматического анализа изображений с использованием алгоритма обнаружения краев для сегментации объекта для количественной оценки количества ядер и митохондриального содержимого (общая интенсивность MitoTracker®Red) на изображение. После выделения агрегатов и мертвых клеток результаты были определены примерно по 386 изображениям на обработку (в среднем 39 ± 4 ядра на изображение). После 48 часов хронической низкочастотной ЭПС активность цитрат-синтазы (CS) определяли спектрофотометрически из клеточных гомогенатов, приготовленных из мышечных трубок в соответствии с протоколом поставщика (Citrate Synthase Activity Assay Kit, Sigma-Aldrich®, St.Луис, Миссури). Активность цитратсинтазы в гомогенатах клеток мышечных трубок, стимулированных в течение 48 часов, сравнивали с активностью в гомогенатах нестимулированных контрольных мышечных трубок.

Выделение РНК и анализ экспрессии генов с помощью TaqMan® RT-PCR в реальном времени

Собирали

клеток и выделяли общую РНК с помощью набора для выделения общей РНК Agilent в соответствии с протоколом выделения общей РНК, разработанным поставщиком. Тотальную РНК подвергали обратной транскрипции с помощью олигопраймеров с использованием Perkin-Elmer Thermal Cycler 9600 (25 ° C в течение 10 минут, 37 ° C в течение 1 часа 20 минут и 85 ° C в течение 5 минут) и набора реагентов для обратной транскрипции TaqMan.Два микрограмма общей РНК добавляли на 20 мкл общего реакционного раствора TaqMan. ПЦР в реальном времени выполняли с использованием системы обнаружения ABI PRISMT 7000 (Applied Biosystems, Уоррингтон, Великобритания). Экспрессию РНК определяли с помощью SYBRT Green, а праймеры конструировали с использованием Primer ExpressT (Applied Biosystems, Warrington, UK). Каждый ген-мишень количественно определяли в трех экземплярах и проводили в реакционном объеме 25 мкл в соответствии с протоколом поставщика. Все анализы выполнялись в течение 40 циклов (95 ° C в течение 12 с, затем 60 ° C в течение 60 секунд.Уровни транскрипции были нормализованы по гену контроля домашнего хозяйства 36В4. Другой протестированный ген контроля домашнего хозяйства, GAPDH, дал те же результаты, что и 36B4. Следующие прямой и обратный праймеры использовали в концентрации 30 мкМ: 36B4 ( acc_no M17885 ): F: CCATTCTATCATCAACGGGTACAA, R: AGCAAGTGGGAAGGTGTAATCC; GAPDH ( acc_no NM002046 ): F: TGCACCACCAACTGCTTAGC, R: GGCATGGACTGTGGTCATGAG; CPT1b ( acc_no : L39211 ): F: GAGGCCTCAATGACCAGAATGT, R: GTGGACTCGCTGGTACAGGAA; цитохром C ( acc_no NM001916 ): F: CTGCCAACAACGGAGCATT, R: CGTGAGCAGGGAGAAGACGTA; PGC-1α ( в соотв.№ NM013261.3 ): AAAGGATGCGCTCTCGTTCA, R: TCTACTGCCTGGAGACCTTGATC; IL-6 ( acc_no NM000600 ): F: CGGGAACGAAAGAGAAGCTCTAT, R: AGGCGCTTGTGGAGAAGGA; PDK4 ( acc_no BC040239 ): F: TTTCCAGACCAACCAATTCACA, R: TGCCCGCATTGCATTCTTA; GLUT1 ( acc_no K03195 ): F: CAGCAGCCCTAAGGATCTTCTCA, R: CCGGCTCGGCTGACATC; GLUT4 ( acc_no M20747 ): F: ACCCTGGTCCTTGCTGTGTT, R: ACCCCAATGTTGTACCCAAACT; MHCI ( acc_no NM005963 ): F: CCAGACTGTGTCTGCTCTCTTCAG, R: CAGGACAAGCTCATGCTCC-AT; MHCIIa ( acc_no NM017534 ): F: AAGGTCGGCAATGAGTATGTCA, R: CAACCATCCACAGGAACATCTTC.

Представление данных и статистика

Статистический анализ общего воздействия острого высокочастотного ЭПС на содержание АТФ, PCr и лактата был выполнен с использованием линейных смешанных моделей (LMM) (SPSS version 17, SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс). В экспериментах, в которых эффекты 24-часового и 48-часового ЭПС сравнивали с нестимулированными контрольными клетками, данные анализировали с использованием непараметрического теста Краскела-Уоллиса, тогда как в экспериментах, в которых сравнивали две группы (обработка ЭПС по сравнению с нестимулированными контрольными клетками), нестимулированные контрольные клетки не подвергались анализу. Были выполнены параметрические парные тесты Вилкоксона (GraphPad Prism 5.0 для Windows, GraphPad Software Inc., Сан-Диего, Калифорния). Все значения на рисунках представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего, где n представляет количество выполненных экспериментов, каждый эксперимент проводился с клетками от отдельных (разных) доноров, с тремя образцами в каждом эксперименте. Статистическая значимость была установлена на уровне P <0,05. В большинстве экспериментов результаты представлены нормализованными для нестимулированных контрольных клеток, а абсолютные значения нестимулированных контрольных клеток указаны в тексте рисунка.

Результаты

Влияние острого высокочастотного ЭПС на захват дезоксиглюкозы, содержание в клетках АТФ, PCr и лактата в культивируемых мышечных трубках

Чтобы убедиться, что электрическая стимуляция культивируемых мышечных трубок человека приводит к ожидаемым метаболическим изменениям, мышечные трубки подвергали острому высокочастотному EPS, а также исследовали поглощение дезоксиглюкозы и клеточное содержание АТФ, PCr и лактата. Частотная зависимость поглощения дезоксиглюкозы во время EPS показана на рисунке 1A. Острый высокочастотный ЭПС увеличивал захват дезоксиглюкозы культивированными мышечными трубками (рис.1Б). Это поглощение было специфическим, поскольку оно ингибировалось цитохалазином B (20 мкМ) (данные не показаны). Кроме того, количество дезоксиглюкозы, поглощаемой электрически стимулированными мышечными трубками, положительно коррелировало с продолжительностью стимуляции. Содержание АТФ и PCr в клетках в электрически стимулированных мышечных трубках сравнивали с нестимулированными контрольными клетками, инкубированными в течение того же периода времени. В ответ на 5–60 мин электростимуляции содержание как АТФ, так и ПЦр значительно снизилось ( P = 0.001 и P = 0,007 соответственно), в то время как количество лактата значительно увеличилось ( P = 0,03) (Рисунок 1C, общий эффект, линейная смешанная модель, SPSS). В совокупности эти результаты показали, что клетки сокращались и потребляли энергию, и что они реагировали на острый ЭПС так же, как и на однократную тренировку in vivo.

Рисунок 1. Частотная зависимость поглощения дезоксиглюкозы

( A ) Влияние острого высокочастотного ЭПС на поглощение дезоксиглюкозы ( B ) и содержание в клетках АТФ, ПЦр и лактата ( C ) ) . A: Частотная зависимость поглощения дезоксиглюкозы: через восемь дней после начала дифференцировки культивированные миотрубки инкубировали в бессывороточной среде DMEM (5,5 ммоль / л глюкозы) в течение 1 часа в инкубаторе с 5% CO ₂ при 37 ° C. перед добавлением [³ H] дезоксиглюкозы (1 мкКи / мл). Электрическая импульсная стимуляция (30 В, последовательности импульсов 200 мс) применялась к клеткам с использованием частот 2, 5 или 10 Гц в течение первых 15 минут периода поглощения дезоксиглюкозы (60 минут). Значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего для 4 экспериментов, нормированные на нестимулированные контрольные клетки (абсолютные значения 56.4–333,6 нмоль / мг). B: Поглощение дезоксиглюкозы: через восемь дней после начала периода дифференцировки культивированные миотрубки инкубировали в бессывороточной среде DMEM (5,5 ммоль / л глюкозы) в течение 1 часа в инкубаторе с 5% CO ₂ при 37 ° C перед добавлением [³ H] дезоксиглюкоза (1 мкКи / мл). Электроимпульсная стимуляция (100 Гц, 30 В, последовательности импульсов по 200 мс, подаваемые каждые 5 ^и секунды) применялась к клеткам в первые 5-15-30 минут периода поглощения дезоксиглюкозы или в течение всего периода (60 минут). поглощения дезоксиглюкозы.Значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего для 6 экспериментов, нормированные на нестимулированные контрольные клетки (57,9–92,5 нмоль / мг). C: содержание в клетках АТФ, фосфокреатина (PCr) и лактата: через восемь дней после начала периода дифференцировки мышечные трубки предварительно инкубировали в течение 1 часа (37 ° C, 5% CO ₂) с DMEM и высокочастотной электростимуляцией. (100 Гц, 30 В, последовательности импульсов по 200 мс, подаваемые каждые 5 ^и секунды) применяли в течение 5–60 минут. Клетки анализировали на уровни АТФ и PCr с помощью люминесцентной спектрометрии, а содержание в клетках лактата анализировали с помощью флуоресцентной спектрометрии, как описано в разделе «Материалы и методы».Значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего из 3 экспериментов, нормализованные к нестимулированным контрольным клеткам (абсолютные значения: АТФ; 42,5–73,9 нмоль / мг, PCr; 48,4–169,1 нмоль / мг и лактат; 1,9–87,6 нмоль / мг). Общий эффект электрической импульсной стимуляции на клетки был статистически значимым (линейная смешанная модель, SPSS) по сравнению с нестимулированными контрольными клетками ( P = 0,001 для АТФ, P = 0,007 для PCr и P = 0,03 для лактата).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0033203.g001

Влияние хронического низкочастотного ЭПС на метаболизм глюкозы в культивируемых клетках скелетных мышц человека

Мы также интересовались, могут ли эффекты хронического низкочастотного ЭПС на культивируемые скелетные клетки человека имитировать эффекты регулярных физических упражнений in vivo . Видео, показывающее сокращения культивируемых клеток скелетных мышц под EPS, прилагается как видео S1.

Поглощение дезоксиглюкозы было значительно увеличено ( P = 0.004) в культивируемых мышечных трубках после 24 и 48 часов хронической низкочастотной ЭПС на 96% и 145%, соответственно, по сравнению с нестимулированными контрольными клетками. Эффект инсулина не зависел от ЭПС (данные не показаны). Как и в случае острого высокочастотного ЭПС, наблюдаемое увеличение поглощения дезоксиглюкозы после хронического низкочастотного ЭПС было специфическим, поскольку оно ингибировалось цитохалазином В (20 мкМ) (данные не показаны). Окисление глюкозы, измеренное как количество произведенного CO ₂, также значительно увеличилось ( P = 0.008) через 48 часов хронической низкочастотной ЭПС по сравнению с нестимулированным контролем (рис. 2А).

Рис. 2. Влияние хронической низкочастотной ЭПС на глюкозу

( A ) и метаболизм олеиновой кислоты ( B ) . Культивируемые миотрубки электрически стимулировали (1 Гц, 2 мс импульсы, 30 В) в течение последних 24 или 48 часов периода дифференцировки. (A) Поглощение дезоксиглюкозы : после прекращения электростимуляции (8-й день дифференцировки) поглощение [³ H] дезоксиглюкозы (1 мкКи / мл) измеряли в течение 1 часа, как описано в разделе «Материалы и методы».Значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего для 6 экспериментов. * Значительно отличается от нестимулированных контрольных клеток (абсолютные значения 28,0–170,5 нмоль / мг белка) ( P = 0,004, непараметрический тест Краскалла-Уоллиса). Окисление глюкозы : После прекращения электростимуляции (8-й день дифференцировки) измеряли скорость окисления D- [¹⁴ C (U)] глюкозы (2 мкКи / мл), как описано в разделе «Материалы и методы». Значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего для 4 экспериментов. ^* Статистически значимо по сравнению с нестимулированными контрольными клетками (абсолютные значения 2.7–28,4 нмоль / мг белка) ( P = 0,008, непараметрический тест Краскалла-Уоллиса). (B) Метаболизм олеиновой кислоты : через восемь или девять дней после начала дифференцировки мышечные трубки подвергались воздействию [1- ¹⁴ C] OA (1 мкКи / мл) в течение 2 часов и CO ₂, ASM и Связанную с клетками (СА) радиоактивность измеряли, как описано в разделе «Материалы и методы». Значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего для 8 экспериментов. * Статистически значимые по сравнению с нестимулированными контрольными мышечными трубками (абсолютные значения 15.0–166,8 нмоль / мг белка для CA, 0,6–4,0 нмоль / мг белка для ASM и 0,2–2,9 нмоль / мг белка для CO ₂) ( P = 0,04, непараметрический тест Краскалла-Уоллиса).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0033203.g002

Влияние хронической низкочастотной ЭПС на метаболизм жирных кислот в культивируемых мышечных трубках

Известный эффект физических упражнений — увеличение окислительной способности клеток, что приводит к усилению окисления как глюкозы, так и жирных кислот.Мы исследовали влияние хронических низкочастотных ЭПС на метаболизм олеиновой кислоты путем измерения поглощения и продукции растворимых в кислоте метаболитов (ASM) и CO ₂. Полное окисление олеиновой кислоты, измеренное как количество произведенного CO ₂, было значительно увеличено ( P = 0,04) после 48 часов EPS на 35% по сравнению с контрольными клетками (фиг. 2B). Поглощение олеиновой кислоты не было затронуто EPS по сравнению с нестимулированными контрольными клетками (фиг. 2B). β-окисление, измеряемое как количество ASM, также оставалось неизменным после EPS по сравнению с нестимулированными контрольными клетками (рис.2Б).

Влияние хронического низкочастотного ЭПС на содержание митохондрий и активность цитратсинтазы

Чтобы подтвердить результаты, полученные в метаболических экспериментах с глюкозой и олеиновой кислотой, мы исследовали влияние хронической низкочастотной стимуляции в течение 48 часов на содержание митохондрий в культивируемых мышечных трубках. Репрезентативные изображения представлены для контрольных нестимулированных мышечных трубок на рисунке 3A (слева) и для электрически стимулированных мышечных трубок на рисунке 3A (справа). Общая интенсивность MitoTracker®Red FM на ядро была значительно увеличена (2.В 2 раза, фиг. 3B, P = 0,03), и активность цитрат-синтазы имела тенденцию к увеличению ( P = 0,1, фиг. 3C) в обработанных ЭПС клетках по сравнению с нестимулированными контрольными клетками.

Рис. 3. Влияние 48-часовой хронической низкочастотной ЭПС на содержание митохондрий и активность цитрат-синтазы.

Низкочастотный EPS применялся к культивируемым миотрубкам в течение последних 48 часов восьмидневного периода дифференцировки, как описано в разделе «Материалы и методы». ( A ) Живое изображение митохондрий: Клетки окрашивали на ядра (синий) и митохондрии (красный), как описано в разделе «Материалы и методы».Масштабная линейка 50 мкм. Слева: нестимулированные контрольные мышечные трубки. Справа: миотрубки после 48 часов хронической низкочастотной ЭПС. ( B ) Содержание митохондрий в электрически стимулированных мышечных трубках : содержание митохондрий измеряли с помощью визуализации в реальном времени через 48 часов хронической низкочастотной ЭПС. Значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего для 6 экспериментов. * Статистически значимый по сравнению с нестимулированным контролем ( P = 0,03, непараметрический тест согласованной пары Вилкоксона). ( C ) Активность цитратсинтазы в электрически стимулированных мышечных трубках: Активность фермента определяли спектрофотометрически на клеточных гомогенатах, полученных из мышечных трубок, после 48 часов хронического низкочастотного ЭПС, как описано в разделе «Материалы и методы», и сравнивали с активностью в нестимулированных мышечных трубках. контрольные клетки.Значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего для 5 экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0033203.g003

Влияние хронического низкочастотного ЭПС на экспрессию генов и белков в культивируемых мышечных трубках

Наблюдаемые функциональные изменения в метаболизме жирных кислот и глюкозы сопровождались рядом изменений в экспрессии мРНК (рис. 4). Уровень экспрессии мРНК киназы 4 комплекса пируватдегидрогеназы (PDK4) был значительно увеличен ( P = 0.04) через 24 часа ЭПС (рис.4). Уровни экспрессии мРНК следующих генов также имели тенденцию к увеличению: CPT1b ( P = 0,06), цитохрома c ( P = 0,07), PGC-1α ( P = 0,2) и IL-6; миокин, как сообщается, секретируется сокращающимися скелетными мышцами in vivo [35], [36] ( P = 0,07) (рис. 4). На GLUT1 и GLUT4 EPS не влиял (рис. 4). Результаты иммуноблотов отношения фосфорилированных Akt к общему Akt не показали эффекта электростимуляции (данные не показаны).Белковая экспрессия комплексов в цепи переноса электронов не изменялась EPS (данные не показаны).

Рис. 4. Влияние хронической низкочастотной ЭПС на экспрессию генов.

Низкочастотный EPS применялся к культивированным миотрубкам в течение последних 24 часов или 48 часов восьмидневного периода дифференцировки. мРНК выделяли и экспрессию оценивали с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени, как описано в разделе «Материалы и методы», и значения представлены как средние ± стандартная ошибка среднего из 3–6 экспериментов, нормализованные к уровням генов домашнего хозяйства 36B4.Диапазоны кратных изменений уровней экспрессии мРНК в контрольных группах, нормализованные к уровню гена домашнего хозяйства 36B4, составили: 0,3–1,9 для CPT1b, 0,4–1,3 для цитохрома C, 0,001–0,6 для PGC-1α, 0,6– 1,2 для GLUT1, 0,2–2,6 для GLUT4, 0,7–1,0 для PDK4 и 0,1–1,1 для IL-6. * Статистически значимые по сравнению с нестимулированными контрольными клетками ( P = 0,04, непараметрический тест Краскалла-Уоллиса).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0033203.g004

Влияние хронического низкочастотного ЭПС на маркеры медленного окисления

( MHCI ) и быстрого гликолитического ( MHCIIa ) типа волокна

Чтобы оценить влияние EPS на маркеры типа волокон в мышечных трубках, мы дополнительно исследовали экспрессию генов и белков, специфически обогащенных либо волокнами типа I (медленные) (MHCI), либо волокнами типа IIa (быстрые) (MHCIIa).Экспрессия MHCI и MHCIIa, по-видимому, увеличивается и уменьшается, соответственно, таким образом, соотношение мРНК MHCI / MHCIIa имеет тенденцию к увеличению ( P = 0,06) в электрически стимулированных мышечных трубках (фиг. 5A). Экспрессия белка MHCI была значительно увеличена ( P = 0,03) на 45% после 24–48 часов EPS (рис. 5B, C).

Рис. 5. Влияние хронического низкочастотного ЭПС на маркеры медленного окислительного

( MHCI ) и быстрого гликолитического ( MHCIIa ) типов мышечных волокон. Низкочастотный EPS применяли к культивируемым мышечным трубочкам в течение последних 24 часов или 48 часов восьмидневного периода дифференцировки, как описано в разделе «Материалы и методы», перед сбором клеток. ( A ) Соотношение мРНК MHCI / MHCIIa : мРНК выделяли из культивированных миотрубок после обработки EPS. Экспрессию оценивали с помощью ОТ-ПЦР, как описано в разделе «Материалы и методы», и значения представлены как средние ± стандартная ошибка среднего для 4 экспериментов, нормализованные к уровням генов домашнего хозяйства 36В4. ( B ) ( C) Иммуноблот-анализ MHCI после 24 — 48 ч EPS: Аликвоты 40 мкг клеточного белка из общих клеточных лизатов, приготовленных в буфере Лэммли, были электрофоретически разделены на NuPAGE® 4–12% (w / v) Гель Бис-Трис с последующим иммуноблоттингом со специфическими антителами к медленно окисляющему MHCI.(B) Один репрезентативный иммуноблот. (C) Денситометрический анализ иммуноблотов, значения представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего для 6 экспериментов. * Статистически значимые по сравнению с нестимулированными контрольными клетками ( P = 0,03, непараметрический тест согласованной пары Вилкоксона).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0033203.g005

Оценка токсического действия ЭПС на культивируемые миотрубки

На содержание белка в клетках не влияли острые высокочастотные, а также хронические низкочастотные ЭПС в условиях, использованных в экспериментах (данные не показаны).Кроме того, содержание лактатдегидрогеназы не изменилось в среде из миотрубок, подвергнутых хроническому низкочастотному ЭПС в течение 24 и 48 часов по сравнению с нестимулированными контрольными клетками (данные не показаны). Количество ядер в мышечных трубках после 48 часов хронической низкочастотной ЭПС, определенное путем визуализации клеток в реальном времени, не отличалось от нестимулированных контрольных клеток (данные не показаны). После окрашивания трипановым синим был окрашен низкий процент (менее 1%) как в контрольных клетках, так и в электрически стимулированных мышечных трубках, без разницы между двумя группами (данные не показаны).В заключение, EPS не оказывал токсического воздействия на культивируемые клетки скелетных мышц человека.

Обсуждение

Культивированные миотрубки — ценный инструмент для исследования метаболических процессов в скелетных мышцах. В настоящем исследовании мы демонстрируем, как клеточная модель мышечных трубок человека может быть создана как модель упражнений in vitro , которую можно использовать для изучения некоторых адаптаций, наблюдаемых в тренированных скелетных мышцах. Были применены два различных шаблона электрической импульсной стимуляции (EPS): острый, высокочастотный EPS (биполярные последовательности импульсов 200 мс, 100 Гц, подаваемые каждые 5 ^и секунды, 30 В в течение 5–60 минут) для имитации одиночного импульса. набор упражнений; и хронические низкочастотные ЭПС (одиночные биполярные импульсы длительностью 2 мс, 1 Гц при 30 В в течение 24 или 48 часов) для имитации регулярных физических упражнений.

При острой стимуляции культивируемых миотрубок с помощью высокочастотного ЭПС потребление глюкозы и содержание лактата в клетках увеличиваются, в то время как содержание АТФ и ПЦр снижается. Постоянно применяя хронический низкочастотный ЭПС, мы успешно увеличили окислительную способность клеток за счет увеличения метаболизма глюкозы и полного окисления олеиновой кислоты. Кроме того, эти функциональные изменения метаболических процессов сопровождались удвоением митохондриального содержания, измеренного как общая интенсивность MitoTracker®Red, через 48 часов EPS.Активность цитрат-синтазы имела тенденцию к увеличению в мышечных трубках, обработанных ЭПС, хотя и незначительно. Повышенное содержание митохондрий в скелетных мышцах после упражнений, как полагают, является результатом кумулятивного эффекта временного увеличения транскриптов мРНК, кодирующих митохондриальные белки, после повторных тренировок [3], [47]. Временные последовательности молекулярных эффектов, которые возникают в мышцах человека, когда митохондриальный биогенез индуцируется тренировкой с физической нагрузкой, были исследованы в исследовании Perry et al.[48]. Хотя мРНК CS увеличилась уже после первой тренировки, повышение активности CS не наблюдалось до конца 3 ^-го из семи проведенных тренировок. В целом, было показано, что повторяющиеся кратковременные всплески мРНК происходят на ранних этапах обучения, до увеличения активности митохондриальных белков, но время и величина мРНК и белковых ответов различных транскрипционных и митохондриальных белков также значительно варьировались в зависимости от на фазе упражнения они были измерены в [48].Таким образом, отсутствие значительного увеличения активности CS в наших экспериментах после 48 часов ЭПС согласуется или, по крайней мере, отражает сложность и точную временную зависимость молекулярных событий, которые, как было описано, происходили в митохондриальном биогенезе во время упражнений в скелете человека. мышцы. В прикладных условиях мы действительно продемонстрировали ожидаемые функциональные изменения (окисление липидов и метаболизм глюкозы), а также изменения в экспрессии мРНК и белков некоторых факторов, но для демонстрации других изменений, как на уровне мРНК, так и на уровне белка, мы, возможно, имели бы использовать разные шаблоны и периоды времени, и с нынешней моделью это можно сделать в будущей работе.О таком же несоответствии между активностью цитратсинтазы и интенсивностью MitoTracker®Red также сообщалось в недавней работе, представляющей новый, имитирующий упражнения подход к ремоделированию метаболизма липидов в культивируемых мышечных трубках человека [49]. Интересно, что это была такая же клеточная система, как наша, но эффекты, имитирующие упражнения, были вызваны фармакологической активацией. Таким образом, для будущих исследований временной аспект может быть важным фактором, который следует учитывать при проведении исследований, имитирующих упражнения на культурах клеток.

Изменения уровней экспрессии ряда генов наблюдались также после хронической ЭПС. Уровень мРНК PDK4 был значительно увеличен в электрически стимулированных клетках, в то время как уровни мРНК цитохрома c и CPT1b также имели тенденцию к увеличению. На GLUT1 и GLUT4 EPS не повлиял. Более того, отношение уровня мРНК MHCI (генный маркер типа I, типа медленных окислительных волокон) к уровню MHCIIa (генный маркер гликолитических, быстро сокращающихся скелетных мышечных волокон) имеет тенденцию к увеличению в электрически стимулированных мышечных трубках. и это открытие было также подтверждено повышенной экспрессией белка MHCI в обработанных EPS клетках.Кроме того, экспрессия мРНК рецептора γ, активируемого пролифератором пероксисом, коактиватора-1α (PGC-1α), транскрипционного кофактора, называемого главным регулятором митохондриальной функции и биогенеза [50]; который часто рассматривается как важный фактор в клеточных механизмах, вызываемых упражнениями, имел тенденцию к увеличению, хотя и незначительно, также как и уровень мРНК IL-6, интерлейкина, который, как известно, секретируется скелетными мышцами после упражнений in vivo , укрепляя вывод о том, что наша модель EPS может напоминать тренированную мышцу.

Относительный вклад окисления жирных кислот в общую потребность в топливе увеличивается у здоровых субъектов, выполняющих упражнения средней интенсивности, и несколько исследований подтверждают, что упражнения снижают зависимость от углеводов как источника энергии и увеличивают окисление жирных кислот [51], [52] . Скорость окисления олеиновой кислоты значительно увеличилась после 48 часов EPS в нашей модели культуры клеток, в то время как поглощение олеиновой кислоты не изменилось. Хотя было показано, что упражнения увеличивают усвоение жирных кислот у людей, клеточные механизмы повышенного усвоения все еще не ясны, поскольку существуют несоответствия из-за разной продолжительности и интенсивности тренировочных исследований [53].Ключевой фактор, способствующий транспортировке жирных кислот через шаттл карнитина через внешнюю митохондриальную мембрану, CPT1b, был увеличен в исследовании in vivo на людях с упражнениями средней интенсивности в течение более короткой продолжительности (2 месяца) в сопровождении за счет увеличения скорости окисления митохондриальных жирных кислот [54]. Хотя это и незначительно, уровень экспрессии мРНК CPT1b также имел тенденцию к увеличению в нашей модели клеток EPS.

Наша модель хронического низкочастотного ЭПС показала как повышенный импортный, так и окислительный метаболизм глюкозы, и эти эффекты также известны для обученных in vivo волокон [25], [26].Однако мы не наблюдали никакого дополнительного эффекта инсулина и ЭПС на поглощение глюкозы, а также ЭПС не влиял на фосфорилирование Akt. Эти наблюдения согласуются с предположениями об инсулино-независимом пути увеличения поглощения глюкозы [55], [56]. Кроме того, есть предположения, что некоторые ключевые метаболические вещества, обычно запускаемые инсулином, могут также активироваться во время мышечных сокращений в отсутствие этого гормона [26]. Уровни экспрессии мРНК GLUT1 и GLUT4 не зависели от EPS.GLUT4 часто бывает дефицитным в культивируемых клетках скелетных мышц [57], а в первичных мышечных трубках человека базальное поглощение глюкозы обычно опосредуется другими переносчиками глюкозы, такими как GLUT1 и GLUT3 [58], [59]. Несоответствие между уровнями мРНК GLUT и функциональными данными ранее сообщалось в культивируемых клетках скелетных мышц человека [60], [61]. С другой стороны, PDK4, ингибитор пируватдегидрогеназного комплекса, который является важным фактором переключения окисления в сторону жирных кислот [62], был значительно повышен в обработанных EPS клетках, указывая на возможное переключение в предпочтительном топливе мышечных трубок.При выращивании в культуре сателлитные клетки созревают до миотрубок, которые обычно проявляют характеристики гликолитических мышечных волокон типа II [41] и характеризуются низкой митохондриальной окислительной способностью [63], [64], с более высоким топливным предпочтением углеводов над липидами [ 65]. Это может быть связано с отсутствием пролиферации митохондрий in vitro при отсутствии соответствующих сигналов окружающей среды, таких как сокращения. Таким образом, подходы, которые увеличивают митохондриальный окислительный потенциал мышечных трубок человека, очень актуальны в отношении исследований клеточного энергетического метаболизма.

Несмотря на то, что трудно напрямую сравнить эффекты in vivo и упражнений с наблюдаемыми эффектами в нашей модели ЭПС в культивируемых мышечных трубках человека, некоторые из наших наблюдений демонстрируют важные аспекты эффектов in vivo и упражнений. Таким образом, применяя нашу модель хронического непрерывного низкочастотного ЭПС, мы наблюдали важные функциональные изменения в культуре клеток: улучшенное окисление липидов и метаболизм глюкозы, которые являются известными эффектами физических упражнений in vivo .Кроме того, мы также продемонстрировали возможное переключение типа волокна, измеренное по повышенной экспрессии белка MHCI в обработанных EPS клетках. Насколько нам известно, о таких изменениях ранее не сообщалось в культурах клеток человека. Таким образом, мы полагаем, что наша модель ЭПС в культивируемых клетках скелетных мышц человека представляет собой уникальную физиологически релевантную модель ex vivo , которую можно использовать для дальнейшего изучения взаимосвязи между клеточными механизмами, вызванными физическими упражнениями, и лежащими в основе сигнальными путями в контролируемых условиях.В частности, настоящая модель может представлять большой интерес для выяснения потенциала сокращений на энергетический метаболизм в клетках скелетных мышц, полученных от различных групп людей (страдающих ожирением, непереносимостью глюкозы, спортсменов и т. Д.). В настоящее время исследуются эффекты, вызванные сокращением, на энергетический метаболизм в клетках скелетных мышц человека, происходящие от чрезвычайно тучных людей с диабетом 2 типа или без него.

Дополнительная информация

Видео S1.

Фильм, демонстрирующий сокращение культивируемых клеток скелетных мышц человека, подвергшихся хроническому низкочастотному ЭПС. Культивируемые клетки скелетных мышц человека подвергались хроническому низкочастотному ЭПС (одиночные биполярные импульсы длительностью 2 мс, 30 В и 1 Гц непрерывно в течение последних 24 или 48 часов периода дифференцировки). Наблюдаемые сокращения были синхронны с электрическими импульсами.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0033203.s001

(M4V)

Благодарности

Авторы благодарят к.т.н. Гейру Флорхольмену за измерения лактата, АТФ и ПЦр, докторуГербранду Костеру и профессору Оддмунду Бакке из платформы визуализации NORMIC-UiO факультета молекулярной биологии Университета Осло за поддержку и использование оборудования, а также Осе-Карине Фьельдхейм и Роберту Смиту за отличную техническую помощь.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: NN SSB ETK IR IFH ACR GHT VA. Проведены эксперименты: NN SSB ETK IR IFH ACR GHT VA. Проанализированы данные: NN SSB ETK IR IFH ACR GHT VA. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: NN SSB ETK IR IFH ACR GHT VA.Написал статью: NN.

Список литературы

1. Бут FW, Thomason DB (1991) Молекулярная и клеточная адаптация мышц в ответ на упражнения: перспективы различных моделей. Physiol Rev 71: 541–585.
2. Бут Ф.В., Лис С.Дж. (2007) Фундаментальные вопросы о генах, бездействии и хронических заболеваниях. Физиологическая геномика 28: 146–157.
3. Fluck M, Hoppeler H (2003) Молекулярные основы пластичности скелетных мышц — от гена к форме и функции.Rev Physiol Biochem Pharmacol 146: 159–216.
4. Fluck M (2006) Функциональная, структурная и молекулярная пластичность скелетных мышц млекопитающих в ответ на физические нагрузки. J Exp Biol 209: 2239–2248.
5. Thelen MH, Simonides WS, van Hardeveld C (1997) Электрическая стимуляция мышечных трубок C2C12 вызывает сокращения и репрессирует зависимую от тиреоидных гормонов транскрипцию гена Ca2 + -ATPase саркоплазматического ретикулума быстрого типа. Биохимический журнал 321 (Pt 3): 845–848.
6. Fujita H, Nedachi T, Kanzaki M (2007) Ускоренная сборка саркомера de novo за счет стимуляции электрическим импульсом в мышечных трубках C2C12. Exp Cell Res 313: 1853–1865.
7. Парк Х., Бхалла Р., Сайгал Р., Радисич М., Уотсон Н. и др. (2008) Эффекты электростимуляции в мышечных конструкциях C2C12. Журнал тканевой инженерии и регенеративной медицины 2: 279–287.
8. Nedachi T, Fujita H, Kanzaki M (2008) Модель сократительной мышечной трубки C2C12 для изучения реакций скелетных мышц, вызываемых упражнениями.Am J Physiol Endocrinol Metab 295: E1191–1204.
9. Burch N, Arnold AS, Item F, Summermatter S, Brochmann Santana Santos G, et al. (2010) Электроимпульсная стимуляция культивируемых мышечных клеток мышей воспроизводит изменения экспрессии генов в тренированных мышцах мыши. PloS one 5: e10970.
10. Яно С., Морино-Кога С., Кондо Т., Суико М.А., Кога Т. и др. (2011) Поглощение глюкозы клетками L6 скелетных мышц крыс увеличивается под действием электрического тока низкой интенсивности за счет активации фосфатидилинозитол-3-OH киназы (PI-3K) / Akt пути.Журнал фармакологических наук 115: 94–98.
11. Silveira LR, Pilegaard H, Kusuhara K, Curi R, Hellsten Y (2006) Вызванное сокращением увеличение экспрессии гена рецептора, активируемого пролифератором пероксисом (PPAR) -gamma coactivator 1alpha (PGC-1alpha), митохондриального разобщающего белка 3 (UCP3) и гексокиназа II (HKII) в первичных клетках скелетных мышц крысы зависит от активных форм кислорода. Biochimica et biophysica acta 1763: 969–976.
12. Pette D, Dusterhoft S (1992) Измененная экспрессия генов в быстро сокращающихся мышцах, вызванная хронической низкочастотной стимуляцией.Am J Physiol 262: R333–338.
13. Коффи В.Г., Хоули Дж. А. (2006) Тренинг для повышения производительности: выводы из молекулярной биологии. Международный журнал спортивной физиологии и производительности 1: 284–292.
14. Holloszy JO, Booth FW (1976) Биохимические адаптации к упражнениям на выносливость в мышцах. Анну Рев Физиол 38: 273–291.
15. Holloszy JO, Coyle EF (1984) Адаптация скелетных мышц к упражнениям на выносливость и их метаболические последствия.J Appl Physiol 56: 831–838.
16. Коффи В.Г., Хоули Дж. А. (2007) Молекулярные основы тренировочной адаптации. Спортивная медицина 37: 737–763.
17. Чоу Л.С., Гринлунд Л.Дж., Асманн Ю.В., Шорт К.Р., МакКрэди С.К. и др. (2007) Влияние тренировки на выносливость на спонтанную активность мышей, содержание митохондриальной ДНК в мышцах, транскрипты генов и функцию. Журнал прикладной физиологии 102: 1078–1089.
18. Баар К., Венде А.Р., Джонс Т.Э., Марисон М., Нолти Л.А. и др.(2002) Адаптация скелетных мышц к упражнениям: быстрое увеличение транскрипционного коактиватора PGC-1. FASEB J 16: 1879–1886.
19. Hood DA (2001) Приглашенный обзор: индуцированный сократительной активностью митохондриальный биогенез в скелетных мышцах. J Appl Physiol 90: 1137–1157.
20. Тарнопольский М.А., Ренни С.Д., Робертшоу Н.А., Федак-Тарнопольский С.Н., Деврис М.К. и др. (2007) Влияние тренировок на выносливость и секса на внутримиоцеллюлярные липиды и ультраструктуру митохондрий, использование субстратов и активность митохондриальных ферментов.Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 292: R1271–1278.
21. Худ Д.А., Иррчер I, Любичич В., Джозеф А.М. (2006) Координация метаболической пластичности в скелетных мышцах. J Exp Biol 209: 2265–2275.
22. van Loon LJ (2004) Использование внутримышечного триацилглицерина в качестве источника субстрата во время физических упражнений у людей. J Appl Physiol 97: 1170–1187.
23. Kiens B (2006) Липидный метаболизм скелетных мышц при физических нагрузках и инсулинорезистентность.Physiol Rev 86: 205–243.
24. Харридж С.Д. (2007) Пластичность скелетных мышц человека: экспрессия генов для функции in vivo. Exp Physiol 92: 783–797.
25. Рихтер Э.А., Рудерман Н.Б. (2009) AMPK и биохимия упражнений: последствия для здоровья и болезней человека. Биохимический журнал 418: 261–275.
26. Santos JM, Ribeiro SB, Gaya AR, Appell HJ, Duarte JA (2008) Пути поглощения глюкозы в скелетных мышцах, усиленного сокращением.Международный журнал спортивной медицины 29: 785–794.
27. Ebeling P, Koistinen HA, Koivisto VA (1998) Инсулиннезависимый транспорт глюкозы регулирует чувствительность к инсулину. Письма FEBS 436: 301–303.
28. Hayashi T, Wojtaszewski JF, Goodyear LJ (1997) Регулирование транспорта глюкозы в скелетных мышцах с помощью физических упражнений. Американский журнал физиологии 273: E1039–1051.
29. Рихтер Е.А., Гаретто Л.П., Гудман М.Н., Рудерман Н.Б. (1982) Метаболизм глюкозы в мышцах после упражнений у крысы: повышенная чувствительность к инсулину.Журнал клинических исследований 69: 785–793.
30. Томас Э., Зорзано А., Рудерман Н. Б. (2002) Физические упражнения и передача сигналов инсулина: историческая перспектива. Журнал прикладной физиологии 93: 765–772.
31. Боттинелли Р., Реджиани С. (2000) Волокна скелетных мышц человека: молекулярное и функциональное разнообразие. Prog Biophys Mol Biol 73: 195–262.
32. Lillioja S, Young AA, Culter CL, Ivy JL, Abbott WG, et al. (1987) Плотность капилляров скелетных мышц и тип волокон являются возможными детерминантами инсулинорезистентности in vivo у человека.Дж. Клин Инвест 80: 415–424.
33. Lin J, Wu H, Tarr PT, Zhang CY, Wu Z и др. (2002) Коактиватор транскрипции PGC-1 alpha управляет образованием медленно сокращающихся мышечных волокон. Природа 418: 797–801.
34. Педерсен BK, Akerstrom TC, Nielsen AR, Fischer CP (2007) Роль миокинов в упражнениях и метаболизме. J Appl Physiol 103: 1093–1098.
35. Педерсен Б.К., Стинсберг А., Фишер С., Келлер С., Келлер П. и др. (2003) В поисках фактора физической нагрузки: является ли ИЛ-6 кандидатом? J Muscle Res Cell Motil 24: 113–119.
36. Педерсен Б.К., Стинсберг А., Фишер С., Келлер С., Келлер П. и др. (2004) Метаболическая роль ИЛ-6, вырабатываемого во время упражнений: является ли ИЛ-6 фактором упражнений? Proc Nutr Soc 63: 263–267.
37. Кэри А.Л., Стейнберг Г.Р., Маколей С.Л., Томас В.Г., Холмс А.Г. и др. (2006) Интерлейкин-6 увеличивает индуцированное инсулином удаление глюкозы у человека, а также поглощение глюкозы и окисление жирных кислот in vitro через АМФ-активированную протеинкиназу. Диабет 55: 2688–2697.
38. Рудерман Н.Б., Келлер С., Ричард А.М., Саха А.К., Луо Зи и др. (2006) Интерлейкин-6 регуляция AMP-активируемой протеинкиназы. Возможная роль в системном ответе на упражнения и профилактика метаболического синдрома. Диабет 55: Дополнение 2S48–54.
39. Aas V, Torbla S, Andersen MH, Jensen J, Rustan AC (2002) Электрическая стимуляция улучшает ответы на инсулин в модели гипергликемии на человеческих клетках скелетных мышц. Ann N Y Acad Sci 967: 506–515.
40. Недачи Т., Хатакеяма Х., Коно Т., Сато М., Канзаки М. (2009) Характеристика индуцируемых сокращением хемокинов CXC и их роли в миоцитах C2C12. Американский журнал физиологии эндокринологии и метаболизма 297: E866–878.
41. Gaster M, Kristensen SR, Beck-Nielsen H, Schroder HD (2001) Клеточная модельная система дифференцированных мышечных трубок человека. Apmis 109: 735–744.
42. Генри Р.Р., Абрамс Л., Никулина С., Чиаральди Т.П. (1995) Действие инсулина и метаболизм глюкозы у субъектов недиабетического контроля и NIDDM.Сравнение с использованием культур клеток скелетных мышц человека. Диабет 44: 936–946.
43. Gaster M, Beck-Nielsen H, Schroder HD (2001) Условия пролиферации сателлитных клеток человека. Долевое содержание сателлитных ячеек. АПМИС 109: 726–734.
44. Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ (1951) Измерение белка с фенольным реагентом Folin. Журнал биологической химии 193: 265–275.
45. Брэдфорд М.М. (1976) Быстрый и чувствительный метод количественного определения количества белка в микрограммах, использующий принцип связывания белок-краситель.Анальная биохимия 72: 248–254.
46. Hessvik NP, Bakke SS, Fredriksson K, Boekschoten MV, Fjorkenstad A, et al. (2010) Метаболическое переключение мышечных трубок человека улучшается за счет n-3 жирных кислот. J. Lipid Res. 51: 2090–2104.
47. Pilegaard H, Ordway GA, Saltin B, Neufer PD (2000) Транскрипционная регуляция экспрессии генов в скелетных мышцах человека во время восстановления после упражнений. Am J Physiol Endocrinol Metab 279: E806-814.
48. Перри К.Г., Лалли Дж., Холлоуэй Г.П., Хейгенхаузер Дж. Дж., Бонен А. и др.(2010) Повторяющиеся временные всплески мРНК предшествуют увеличению транскрипционных и митохондриальных белков во время тренировки скелетных мышц человека. J Physiol 588: 4795–4810.
49. Спаркс Л. М., Моро С., Укропцова Б., Баджпей С., Чивитарезе А. Э. и др. (2011) Ремоделирование липидного обмена и улучшение инсулинорезистентности в первичных мышечных трубках человека. PLoS One 6: e21068.
50. Gleyzer N, Vercauteren K, Scarpulla RC (2005) Контроль факторов специфичности митохондриальной транскрипции (TFB1M и TFB2M) ядерными респираторными факторами (NRF-1 и NRF-2) и коактиваторами семейства PGC-1.Mol Cell Biol 25: 1354–1366.
51. Turcotte LP, Richter EA, Kiens B (1992) Повышенное поглощение и окисление FFA в плазме во время длительных упражнений у тренированных и нетренированных людей. Am J Physiol 262: E791–799.
52. Coggan AR, Raguso CA, Gastaldelli A, Sidossis LS, Yeckel CW (2000) Обмен жиров во время упражнений высокой интенсивности у тренированных на выносливость и нетренированных мужчин. Метаболизм 49: 122–128.
53. Turcotte LP, Fisher JS (2008) Инсулинорезистентность скелетных мышц: роль метаболизма жирных кислот и физических упражнений.Phys Ther 88: 1279–1296.
54. Eriksen L, Dahl-Petersen I, Haugaard SB, Dela F (2007) Сравнение влияния нескольких краткосрочных и одиночных длительных тренировок на гомеостаз глюкозы при сахарном диабете 2 типа. Диабетология 50: 2245–2253.
55. Дуэн А.Г., Рамлал Т., Растоги С., Билан П.Дж., Карти Г.Д. и др. (1990) Физические упражнения вызывают набор «инсулино-чувствительного переносчика глюкозы». Доказательства существования различных пулов внутриклеточных переносчиков инсулина и переносчиков физических упражнений в скелетных мышцах.Журнал биологической химии 265: 13427–13430.
56. Валлберг-Хенрикссон Х., Констебль С.Х., Янг Д.А., Холлоши Дж.О. (1988) Транспорт глюкозы в скелетные мышцы крысы: взаимодействие между упражнениями и инсулином. Журнал прикладной физиологии 65: 909–913.
57. Майкл LF, Wu Z, Cheatham RB, Puigserver P, Adelmant G и др. (2001) Восстановление экспрессии гена инсулино-чувствительного переносчика глюкозы (GLUT4) в мышечных клетках с помощью транскрипционного коактиватора PGC-1.Proc Natl Acad Sci U S A 98: 3820–3825.
58. Аль-Халили Л., Карти Г.Д., Крук А. (2003). Опосредованное РНК-интерференцией снижение GLUT1 ингибирует индуцированный сывороткой транспорт глюкозы в первичных клетках скелетных мышц человека. Biochem Biophys Res Commun 307: 127–132.
59. Гастер М., Хандберг А., Шурманн А., Йуст Х.Г., Бек-Нильсен Х. и др. (2004) GLUT11, но не GLUT8 или GLUT12, экспрессируется в скелетных мышцах человека по типу волокон. Арка Пфлюгерса 448: 105–113.
60. Касе Е.Т., Венсаас А.Дж., Аас В., Хойлунд К., Левин К. и др. (2005) Накопление липидов в скелетных мышцах при диабете 2 типа может затрагивать путь рецептора X печени. Диабет 54: 1108–1115.
61. Kase ET, Thoresen GH, Westerlund S, Hojlund K, Rustan AC, et al. (2007) Антагонист рецептора X печени снижает образование липидов и увеличивает метаболизм глюкозы в мышечных трубках у худых, страдающих ожирением и диабетиков 2 типа. Диабетология 50: 2171–2180.
62.Бак М.Дж., Сквайр Т.Л., Эндрюс М.Т. (2002) Координированная экспрессия гена PDK4: средство регулирования отбора топлива у гибернирующих млекопитающих. Физиологическая геномика 8: 5–13.
63. Sarabia V, Lam L, Burdett E, Leiter LA, Klip A (1992) Транспорт глюкозы в клетках скелетных мышц человека в культуре. Стимуляция инсулином и метформином. Дж. Клин Инвест 90: 1386–1395.
64. Укропцова Б., Макнейл М., Середа О., де Йонге Л., Се Х и др. (2005) Динамические изменения окисления жиров в первичных миоцитах человека отражают метаболические характеристики донора.Дж. Клин Инвест 115: 1934–1941.
65. Aas V, Hessvik NP, Wettergreen M, Hvammen AW, Hallen S, et al. (2010) Хроническая гипергликемия снижает окисление субстратов и нарушает метаболическое переключение мышечных трубок человека.

Контакты ООО «Компания «РуСтан»

OOO ПКФ Промресурс (Rustan) — rustan.ru

Нужен станок? Надёжный поставщик компания РуСтан

Компания «РуСтан»: европейское качество по доступным ценам

Оборудование от компании «РуСтан» – основа надёжного и современного производства

Широкий спектр оборудования по выгодной цене

Почему клиенты выбирают «РуСтан»

«Компания RuStan» — контакты, товары, услуги, цены

токарные станки с ЧПУ, фрезерные станки

СК Роутер — фрезерные и токарные станки с ЧПУ

Назначение и обрабатываемые материалы

Станки в наличии и на заказ

Интерьер крем-отделяющей комнаты. Ферма братьев Рустан недалеко от Диккенса, штат Айова — цифровой файл с оригинального нег.

Получение копий

Доступ к оригиналам

Living Content 34. Интервью с Рустаном Сёдерлингом.

Анкона — Сен-Север-де-Рустан — 9 способов добраться на поезде, самолете и автобусе

Как добраться до Рустана в Макати на автобусе или поезде

Общественный транспорт до Rustan в Makati City

Die Konservierung-Restaurierung des Schaukelpferdes «Rustan» из музея Salzburger Spielzeug (Дата 1860; 110 x 45 x 83 см)

Где купить | Dyson.ph

Электроимпульсная стимуляция культивируемых клеток скелетных мышц человека как модель упражнений in vitro

Аннотация

Предпосылки и цели

Методы

Результаты

Выводы

Введение

Материалы и методы

Материалы

Заявление об этике

Культуры клеток скелетных мышц человека

Электроимпульсная стимуляция мышечных клеток

Содержание АТФ, PCr и лактата

Измерение лактатдегидрогеназы

Метаболизм глюкозы

Метаболизм жирных кислот после хронического низкочастотного EPS

Иммуноблоттинг после хронической низкочастотной ЭПС

Окрашивание и живое изображение митохондрий и анализ активности ферментов после хронической низкочастотной EPS

Выделение РНК и анализ экспрессии генов с помощью TaqMan® RT-PCR в реальном времени

Представление данных и статистика

Результаты

Влияние острого высокочастотного ЭПС на захват дезоксиглюкозы, содержание в клетках АТФ, PCr и лактата в культивируемых мышечных трубках

Влияние хронического низкочастотного ЭПС на метаболизм глюкозы в культивируемых клетках скелетных мышц человека

Влияние хронической низкочастотной ЭПС на метаболизм жирных кислот в культивируемых мышечных трубках

Влияние хронического низкочастотного ЭПС на содержание митохондрий и активность цитратсинтазы

Влияние хронического низкочастотного ЭПС на экспрессию генов и белков в культивируемых мышечных трубках

Влияние хронического низкочастотного ЭПС на маркеры медленного окисления

Оценка токсического действия ЭПС на культивируемые миотрубки

Обсуждение

Дополнительная информация

Видео S1.

Благодарности

Вклад авторов

Список литературы

Добавить комментарий Отменить ответ