3D выращивание: 3D прототипирование моделей, деталей — аддитивные технологии от DDM.Lab

Содержание

Быстрое 3D-прототипирование моделей на заказ, 3D-печать изделий на 3д принтере в Москве по выгодной цене

Компания Globatek.3D предлагает услуги 3D печати в Москве и области, а также доставку готовых изделий по всей России. 3D-печать позволяет «выращивать» по слоям изделие по нужным вам параметрам. Скорость, точность и снижение затрат на производство единичных образцов — основные преимущества 3D-печати.

Технология быстрого прототипирования производит моделирование изделий любой сложности по данным из CAD-программ. Печать 3д моделей занимает небольшое количество времени: от нескольких часов до нескольких дней. Высокая скорость и небольшая стоимость изготовления сохраняет бюджет и время на этапе проектирования.

Вам необходимо напечатать образец на 3D-принтере? Позвоните в центр прототипирования Globatek.3D по телефону 8 (495) 646-15-33 или напишите на почту [email protected]

Преимущества 3D-печати и быстрого прототипирования

  • Низкая цена готовых изделий по сравнению с традиционными способами производства
  • Значительное повышение гибкости производства
  • Повышение конкурентоспособности производства
  • Снижение себестоимости продукции, особенно для мелкосерийнойного производства
  • Сокращение сроков выхода на рынок новой продукции
  • Интеграция компьютерных технологий и систем САПР
  • Можно вносить изменения в изделие на этапе 3D-моделирования.

Центр прототипирования Globatek.3D предлагает следующие услуги по 3D-печати:

Корпусные изделия

Сувенирная продукция

Фигурки людей и персонажей игр

Промышленные
прототипы

Мастер-модели

Восковки

Материалы для 3D-печати

Для 3D-печати наиболее распространены следующие материалы: воск, ABS-пластик, PLA-пластик, гипс, фотополимер.

Примеры работ

Заказ 3D-печати

Центр прототипирования Globatek.3D принимает заказы на 3D-печать с помощью самого современного оборудования. Хотите узнать точную цену 3D-печати вашего проекта? Позвоните нам по телефону 8 ((495) 646-15-33 или отправьте письмо c 3D-файлом на почту [email protected]

 

Разница между 3D-печатью и быстрым прототипированием

Развитие технологий приводит к рождению различных методов разработки продуктов, которые приносят пользу многим людям, включая инженеров, дизайнеров и т.д. Эти процессы разработки продукта включают 3D-печать и быстрое прототипирование.

3D-печать и быстрое прототипирование - это технологии, используемые в аддитивном производстве. Но некоторые люди думают, что это одно и то же. Некоторые также не понимают, в чем разница между 3D-печатью и быстрым прототипированием.

Технически эти два термина имеют сходство, потому что оба могут создавать модели слой за слоем из данных STL. Однако есть важные компоненты, которые иногда игнорируются. Вот сообщение в блоге, которое поможет отличить 3D-печать от быстрого прототипирования.

Аддитивное производство против субтрактивного производства

В настоящее время аддитивное производство играет важную роль в развитии разработки продукции. Это не только позволяет быстро создавать продукты, но и делает производственный процесс более инновационным и экономичным.

Аддитивное производство или AM - подходящее название для описания технологии, которая используется для создания 3D-объектов путем добавления материалов слой за слоем. Термин «добавка» относится к методу многократного добавления и создания продукта.

Аддитивное производство - это метод, противоположный субтрактивному производству. Субтрактивное производство - это процесс, в котором трехмерные объекты создаются путем резки материалов с помощью стандартного процесса обработки, такого как сверление или фрезерование. Его также называют традиционным производством и используют при обработке с ЧПУ.

Аддитивное производство против 3D-печати против быстрого прототипирования

Чтобы прояснить ситуацию, 3D-печать (например, печать на 3d принтере в ООО «НК-Технологии») и аддитивное производство могут использоваться как взаимозаменяемые. И наоборот, существует обычно воспринимаемая разница между 3D-печатью и аддитивным производством. 3D-печать - это термин, который часто используют СМИ и широкая публика, а аддитивное производство - это слово, часто используемое профессионалами в промышленных секторах.


3D-печать - подходящее слово для описания процесса, но использование аддитивного производства более точное. Принимая во внимание, что быстрое прототипирование является одним из приложений, которые используются для создания новых продуктов с помощью технологии 3D-печати или аддитивного производства.

Определение 3D-печати и быстрого прототипирования

Что такое 3D-печать

3D-печать - это производственный процесс, в ходе которого цифровая 3D-модель превращается в физический объект. В этом процессе материал изготавливается с использованием печатающей головки, сопла или другой технологии печати.

Что такое быстрое прототипирование

Rapid Prototyping или RP - это приложение, используемое в аддитивном производстве для создания модели быстрее обычного процесса. Быстрое прототипирование в основном выполняется с использованием технологии 3D-печати или аддитивного производства.

Из приведенных выше определений они показывают, что 3D-печать и быстрое прототипирование - это два схожих термина, используемых в разных отраслях. Кроме того, есть другие компоненты, которые их отличают.

Разница между 3D-печатью и быстрым прототипированием

  • Цена
    Между стоимостью 3D-печати и быстрым прототипированием существует значительная разница. От износа оборудования, используемых материалов, рабочей силы, обслуживания системы и т. Д. Технология быстрого прототипирования может стоить вдвое дороже, чем 3D-печать.

    Более того, обслуживание 3D-принтера может составлять примерно несколько тысяч долларов в год. Это намного дешевле по сравнению с обслуживанием системы быстрого прототипирования, которая может стоить до 10 000 долларов в год.

  • Сложность метода печати
    Использование 3D-печати требует меньшего или даже минимального обучения (в зависимости от сложности необходимых компонентов и поддерживающих структур) по сравнению с использованием машин для быстрого прототипирования. При быстром прототипировании параметры не так-то просто настроить.
    Однако с помощью 3D-печати можно создавать детали прямо из коробки. Опять же, в зависимости от требуемой точности компонентов. Чем выше точность, тем больше времени нужно на печать компонента. Создание 3D-чертежей, как правило, является тормозом для 3D-печати, но после создания чертежа изготовление деталей дешево, быстро и легко повторяется в любое время.

  • Выбор материала
    Системы 3D-печати не предоставляют широкий выбор материалов, в отличие от быстрого прототипирования. Несмотря на то, что список материалов для 3D-печати увеличивается, он не так доступен, как быстрое прототипирование.

    3D-печать ограничивается ПВХ и другими пластиковыми материалами. Тем не менее, с развитием технологий такие материалы, как керамика, могут быть полностью доступны для 3D-печати в будущем.

  • Уровень точности
    Что касается уровня точности, системы быстрого прототипирования могут обеспечить точную и лучшую отделку по сравнению с 3D-печатью. Хотя обе имеют схожие характеристики, такие как размер деталей, и полагаются на большую степень доступной геометрии, система быстрого прототипирования использует более продвинутую технологию конкретной детали.
    Более того, 3D-принтеры ограничиваются производством более мелких деталей, которые могут поместиться только в 8-дюймовый куб. Поскольку 3D-принтеры небольшие, у них минимальное пространство для создания точных деталей с помощью 3D-принтера. В системах RP размеры строительных камер составляют не менее 10 дюймов с одной стороны, а другие - 3x3x2 фута или больше.

Заключение

Независимо от того, используется ли 3D-печать или быстрое прототипирование, обе эти технологии могут оказать большую помощь вашему бизнесу. Это могло бы открыть больше возможностей для развития продукта. Это также позволит вам исследовать и проверять сложные конструкции, что является конкурентным преимуществом для роста и производительности.

Если вам нужна помощь в решении проблем с 3D-печатью и быстрым прототипированием, хорошей отправной точкой является обращение к надежному производителю в Сиднее, Австралия, который предоставляет такие услуги, как 3D-дизайн и печать, механическое проектирование и черчение, быстрое прототипирование и многое другое. техники.


Источник: Difference between 3D Printing and Rapid Prototyping
Posted by Aaron Chen on 03/02/2020
URL:cmac.com.au/blog/difference-between-3d-printing-rapid-prototyping

Аддитивные технологии в действии

Сегодня аддитивные технологии активно применяются на различных производствах по всему миру. Одним из главных российских драйверов внедрения промышленной 3D-печати является Ростех и входящая в его состав Объединенная двигателестроительная корпорация (ОДК).

О преимуществах аддитивного производства, инновационных методах промышленной 3D-печати и о том как «вырастить» двигатель при помощи лазера – в нашем материале.

Аддитивные технологии: основа промышленной революции

Аддитивное производство (Additive Manufacturing) – это создание изделий, основанное на поэтапном добавлении материала на основу в виде плоской платформы или осевой заготовки. В самом термине «аддитивность» (от лат. additivus – прибавляемый) заложен основной принцип этого процесса. Такой способ изготовления также называют «выращиванием» из-за послойного создания изделия.

Таким образом, суть аддитивного производства – в сложении, а не вычитании. Если при традиционном производстве вначале имеется заготовка, от которой потом отсекается все лишнее, то в случае с аддитивными технологиями новое изделие создается из ничего, а точнее, из расходного материала. Например, в домашних 3D-принтерах – это специальная пластмассовая проволока. Но, как известно, из пластика можно печатать только не слишком прочные детали и предметы. Относительно недавно в 3D-сфере началась новая эра – печать из металлических материалов. Именно данная технология аддитивного производства является основой происходящей сейчас промышленной революции.


В чем же преимущество и революционность этой новой идеи? Наиболее, пожалуй, важное достоинство аддитивных технологий заключается в том, что компьютерные модели деталей можно мгновенно передавать по сети на производственную площадку в любую точку мира. Таким образом, меняется сам привычный уклад производства – 3D-принтер не только добавляет производству мобильности, но и может заменить огромное количество оборудования на обычном заводе.

Среди других ключевых преимуществ – это снижение числа комплектующих частей создаваемых деталей. Например, изготовление обычным методом топливной форсунки для реактивного двигателя требует около 20 разных запчастей, которых нужно соединить с помощью сварки. Применение же 3D-печати позволяет создавать форсунку намного быстрее из специального материала.

Отсюда следует еще один важный момент – экономия исходного сырья и минимизация отходов. Аддитивные технологии позволяют в производстве использовать ровно столько материала, сколько требуется для конкретной детали. При традиционных способах изготовления потери сырья могут составлять до 85%.

Благодаря этому снижается и вес готовой детали, что особенно актуально для авиационной промышленности. Производители авиадвигателей уже научились создавать аддитивным способом различные кронштейны и втулки, которые при сохранении всех прочностных характеристик на 40-50% легче своих «традиционных» аналогов.

Еще одна сильная сторона аддитивного производства – штучное изготовление изделия любой формы. Этим объясняется особый интерес к аддитивным технологиям медицины и авиационно-космической промышленности – отраслей, которые довольно часто требуют мелкосерийного производства. Например, Boeing уже произвел методом аддитивных технологий более 20 тыс. деталей для военных и гражданских самолетов компании. 

ОДК: драйвер внедрения аддитивных технологий

В России один из главных драйверов внедрения аддитивных технологий – Ростех и входящая в его состав Объединенная двигателестроительная корпорация (ОДК). Ростех начал внедрение аддитивных технологий при производстве перспективных российских газотурбинных двигателей, которые будут сертифицированы в 2025 – 2030 годах. Детали, изготовленные этим методом, будут составлять до 20% общей массы двигателя. Внедрение 3D-печати позволит в три раза снизить время и в два раза сократить стоимость изготовления серийных деталей. 

Для этого Госкорпорация создала единый Центр аддитивных технологий на базе рыбинского «ОДК-Сатурн». Здесь разработан и апробирован процесс изготовления деталей селективным сплавлением, начиная от разработки 3D-модели, заканчивая функциональной деталью. Сотни различных опытных деталей, изготовленных селективным плавлением из кобальтового, титанового сплавов, нержавеющей стали, уже успешно прошли стендовые испытания в составе двигателей.


Создание высокотехнологичного Центра аддитивных технологий (ЦАТ) ведется и на другом предприятии ОДК – Московском машиностроительном предприятии имени В.В. Чернышева. Организаторами ЦАТ являются холдинги авиационного кластера Ростеха: помимо ОДК, это «Вертолеты России», КРЭТ и «Технодинамика». Причем клиентами Центра могут стать не только предприятия Госкорпорации, но и другие промышленные организации. Заказчики смогут получить полный спектр услуг: от разработки конструкции до серийного производства и сертификации продукции. Здесь создается целый конструкторско-технологический комплекс, который включит в себя лабораторию металлургических исследований и конструкторское бюро.

В первую очередь в ЦАТ осваиваются две базовых технологии: селективное послойное сплавление лазером металлического порошка и прямое лазерное выращивание.

Лазерное выращивание

Лазерные технологии для печати металлом на сегодняшний день являются наиболее быстро развивающимся методом аддитивного производства. Как упоминалось выше, их можно разделить на две группы: селективное лазерное плавление и прямое лазерное выращивание.

Селективное лазерное плавление (SLS) – технология изготовления сложных по форме и структуре изделий из металлических порошков. Сначала формируется равномерный слой порошка на подложке, а затем происходит плавление порошка при помощи мощного лазерного излучения.

Данная технология 3D-печати металлом способна с успехом заменить классические производственные процессы. К примеру, на пермском моторном заводе «Авиадвигатель» (входит в ОДК) технологию селективного лазерного спекания впервые применили еще в 2010 году для изготовления литых деталей из титановых, никелевых, кобальт-хромовых порошков.

«Сейчас конструкторы разрабатывают детали, геометрию которых традиционными методами – точением или литьем – выполнить крайне сложно или вообще технически невозможно,– а на «выращивание» одной детали, к примеру, завихрителя, кронштейна, гребенки, уходит от 6 до 40 часов», – комментирует начальник отдела разработки перспективных технологий ремонта завода «Авиадвигатель» Александр Ермолаев.


Второй вид лазерной технологии аддитивного производства настолько новый, что пока не имеет устоявшегося названия: «прямое лазерное выращивание» (DMLS) или «гетерофазная лазерная порошковая металлургия». Суть его заключается в том, что металлический порошок подается через специальное сопло непосредственно в ту же область, куда подводится лазерный луч, образуя локальную ванну жидкого расплава. Этот процесс можно образно сравнить с работой струйного принтера для бумаги.

Технология дает возможность подачи нескольких видов металлических порошков в зону выращивания. Таким образом можно создавать изделия с градиентными свойствами, например, одна часть детали может быть коррозионностойкой, а другая – жаростойкой.

Прямое лазерное выращивание позволяет значительно увеличить производительность производства. Например, корпус камеры сгорания для небольшого газотурбинного двигателя можно вырастить с нуля за три часа. Для сравнения – при использовании традиционных технологий на это уходит около двух недель. При этом результаты конструирования видны моментально, и вносить в них изменения можно сразу же. Благодаря этому в десятки раз ускоряется процесс проектирования и создания новой техники.


Данная технология уже нашла свое применение в различных наукоемких отраслях промышленности, в числе которых и двигателестроение. Номенклатура деталей, которые изготавливаются с помощью установки прямого лазерного выращивания, широкая – от гребных винтов до небольших фрагментов современных и перспективных двигателей.

Недавно ОДК ввела в эксплуатацию самую большую в России установку прямого лазерного выращивания из порошковых металлических материалов. Этот 3D-принтер крупногабаритных деталей для промышленных газотурбинных двигателей позволяет производить изделия размером до 2,5 метров в диаметре. К 2021 году на базе ПАО «Кузнецов» данным методом планируется изготавливать более 50 элементов для современных газотурбинных двигателей.

Электронно-лучевая плавка

Электронно-лучевая плавка (EBM) является еще одной технологией аддитивного производства. Этот метод, по сути, практически не отличается от SLS/DMLS печати металлом. Единственное отличие заключается в том, что вместо лазерного луча плавление осуществляется при помощи электроимпульсов.

Технология печати методом электронно-лучевой плавки металлических порошков позволяет изготавливать детали практически любой сложности, даже совсем миниатюрные изделия размером 0,2-0,4 мм. Такой 3D-принтер сможет «напечатать» практически все: от лопаток турбин авиадвигателей до ювелирных изделий.


В мировой практике промышленные электронно-лучевые 3D-принтеры часто используют для производства остеоимплантов – искусственных имплантов костей. Для их построения используют сплавы титана и нержавеющей стали. В отличие от лазерных 3D-принтеров, электронно-лучевые принтеры могут использовать металлические порошки более крупной фракции, например 75-120 мкм. Шероховатая поверхность вовсе не страшна остеоимпланту и даже может обеспечить лучшую сращиваемость в организме. При этом более крупные фракции металлических порошков дешевле по стоимости, и, как следствие, удешевляется процесс производства.

Еще одно преимущество электронно-лучевой плавки – это возможность получать готовые изделия без необходимости дополнительной термообработки в вакуумных печах, как при печати по технологии SLM. Сама печать происходит при высокой температуре в камере. В результате полного локального расплавления порошка детали обладают очень высокой плотностью, сравнимой с технологией литья.

Первый российский электронно-лучевой 3D-принтер для печати металлическими порошками сейчас разрабатывает холдинг «Росэлектроника» Госкорпорации Ростех. Первый полнофункциональный образец будет произведен в конце 2020 года.

3D ПРОТОТИПИРОВАНИЕ ИЗДЕЛИЙ НА 3D ПРИНТЕРЕ (3D ПЕЧАТЬ)

Предлагаем Вашему вниманию быстрое прототипирование. Создаём физические объекты на основе данных компьютерной модели. Имея чертёж или компьютерную 3D модель и получив ее подробные характеристики наш чудо принтер запускает процесс печати (послойного выращивания вашей модели), в итоге получается абсолютно точная копия вашего макета. 3D прототипирование предоставляет широкие возможности по созданию деталей практически любой геометрической формы и сложности, значительно сокращая время разработки и внедрения прототипа изделия.

Наша компания готова предложить Вам изготовление физических объектов на 3D принтере: 

  • с использованием АБС-пластика ; 
  • с использованием PLA-пластика ; 
     


В самом начале пути прототипирование предполагали применять только в промышленном производстве, но на практике оказалось, что уже сейчас эта технология развивается очень большими темпами, что позволяет делать единичные экземпляры и мелкосерийные партии по разумной цене и разумными временными затратами. На данный момент 3D прототипирование моделей охватывает практически все области нашей жизни эта технология и устройства позволяют создавать высокоточные модели разных размеров с использованием различных материалов.

Благодаря низким ценам расходных материалов, 3D прототипирование становится всё более популярным в учебных заведениях: дипломные работы, дизайн-студии, архитектурные и реставрационные мастерские.

Мы качественно и в кротчайшие сроки осуществляем прототипирование изделий практически любого уровня сложности. Специалисты нашей компании в совершенстве владеют навыками в данной области. На нашем оборудовании возможно изготовить прототипы небольшой партии или в единственном экземпляре. В конечном итоге у Вас выйдет существенная экономия денег и времени, если Вы обратитесь именно к нам.


Что бы осуществить создание физической 3D модели и выполнить Ваш заказ в кротчайшие сроки и с максимальной точностью, нам нужен от Вас чертёж, фотография или компьютерная модель в любом формате.

Прототипирование, 3D печать, или производство воображения.

До недавнего времени понятие «печать» у нас ассоциировалась исключительно с нанесением какого-либо изображения или текста на бумагу. Иначе говоря, «плоского на плоское». Современное понятие «печати» значительно расширилось. Одним из последних ноу-хау в этой сфере стало прототипирование, или 3D печать.

Сегодня 3D печать для Беларуси явление новое, и поэтому далеко не всем понятеное.

Компания «Белый Терем» является официальным представителем производителя 3D оборудования 3D Systems. В этой статье специалисты компании раскроют секреты уникального процесса 3D печати и выделят перспективы его применения.

3D печать, как назвал ее автор концепции третьей индустриальной революции, — это производство воображения. Иными словами, 3D печать — это наглядное воплощение ваших идей.

Сегодня 3D принтеры 3D Systems, способны слой за слоем «выращивать» объёмные предметы, то есть создавать реальные физические объекты по трехмерным моделям.
 

Принцип 3D печати:

  • Файл с трехмерными данными импортируется в программное обеспечение ЗD принтера. Программа «нарезает» трехмерную модель на тонкие поперечные слои и отправляет информацию на принтер.
  • 3D принтер создает модель слой за слоем, распределяя слой порошка и нанося связующее вещество на текущее поперечное сечение модели.
  • Процесс повторяется до тех пор, пока не будут отпечатаны все слои, и изделие можно будет извлечь из 3D принтера.

Таким образом, мы печатаем, а вы оцениваете физические модели разрабатываемых объектов практически в их окончательном виде. При необходимости прототип можно подвергнуть дополнительной ручной обработке — ошкуриванию, грунтовке, окраске – материал это допускает

Мы предоставляем уникальную возможность 3D печати с 24-битным (RGB) цветом и обеспечиваем получение в течение нескольких часов моделей, точнейшим образом отражающих Ваши оригинальные дизайнерские идеи. Цветные модели предоставляют значительно больше информации, чем любые другие быстрые прототипы, что дает Вам стратегическое преимущество при разработке продуктов.
 

На каком оборудовании осуществляем 3D печать?

  • ZPrinter 450 компании 3D Systems. В качестве строительного материала для 3D печати применяется композитный порошок, по свойствам схожий с гипсом.
  • ZBuilder. Этот 3D принтер обеспечивает построение изготовление прототипов, сравнимых с изготовленными литьем под давлением.

Как заказать 3D печать?

  • Трехмерная модель, присылаемая нам для 3D печати, должна быть в формате FBX/STL/3DS/PRT/VRML .
  • Идеальный случай, конечно, — это когда у заказчика уже есть готовая трехмерная модель. Это сократит время ее изготовления и ускорит процесс расчета затрат 3D модель по чертежам, эскизам или фотографиям.

Преимущества 3D печати:

  • Скорость построения моделей.
  • Минимальное время получения готового прототипа может составлять всего час-полтора с момента получения модели.
  • Низкая стоимость по сравнению с изготовлением образца-модели в мастерских.
  • Это обусловлено, в первую очередь, невысокой стоимостью используемого порошка и возможностью повторного использования остатков расходного материала, т.е. процесс «выращивания» является безотходным.
  • Возможность одновременной печати несколько изделий.
  • Изготовление фигур самой сложной формы разного размера.
  • Печать моделей в цвете.
  • Высокое качество «отпечатанных» 3D прототипов.

Это наиболее весомые и яркие характеристики, выделяющие процесс прототипирования. Тенденция развития технологии 3D печати ведет к тому, что вскоре ручной труд станет лишь дополнением для автоматизированного производства. И это в свою очередь, ускорит производственные процессы, повысит качество производимого товара в любой отрасли, сократит время на внедрение инноваций и развитие той или иной отрасли станет более стремительным. Не стоит забывать также, что 3D печать — это не только макеты-прототипы. Уже сейчас наши продукты используются в промышленном дизайне, прототипировании узлов и механизмов, а также при создании мастер-моделей.

И это далеко не весь список преимуществ и ярких характеристик трехмерной печати. Мы постоянно расширяем его благодаря нашим клиентам и неограниченным вариациям их заказов.

Выращивание культур опухолей в 3D-формате для исследования их ответа на лекарственное воздействие

Насущной проблемой нашего времени является высокая токсичность и низкая эффективность химиопрепаратов, используемых в лечении онкологических заболеваний. Любая опухоль каждого конкретного пациента индивидуальна за счет особенной микрогетерогенности клеток, определенного набора молекулярно-генетических маркеров, собственного спектра продуцируемых биологических веществ и состава рецепторов. В связи с этим оптимальным методом для решения вопроса о выборе химиопрепарата для конкретного больного был бы подбор лекарства, избирательно подавляющего invitro рост опухолевой культуры, приготовленной на основе клеток его опухоли. Такой подход становится возможным благодаря применению современных клеточных технологий выращивания культуры злокачественной ткани вне организма. Так же, как бактериологическое исследование является золотым стандартом для постановки диагноза инфекционного заболевания, исследование invitro чувствительности на лекарственную терапию опухолевых клеток, взятых из организма, уже в ближайшее время может стать одним из стандартов обследования больных с онкологическими заболеваниями.

Наиболее эффективной и максимально приближенной по свойствам и организации к естественной опухоли системой, использующейся в настоящее время при скрининге потенциальных противоопухолевых препаратов [1], может быть система 3D-культуры, представленная сферическими конгломератами. Впервые выращивание подобных культур клеток документально отмечено в 1944 г. Иоганесом Холтфретером [2], работавшим со сферическими агрегатами эмбриональных клеток, которые имитировали плотные ткани, бессосудистые опухоли, тела эмбрионов.

Клеточный рост монослойной культуры, уже широко использующейся в доклинических испытаниях, по многим параметрам не отражает истинной картины роста опухоли в живом организме, где огромное значение в ее прогрессии имеют взаимодействия не только между клетками самой опухоли, но и с окружающим ее экстраклеточным матриксом, представленным в своей основе клетками соединительной ткани и коллагеновыми волокнами. Особенности роста отдельных клеток опухоли в монослойной, 2D- и 3D-культурах влияют на характер реакции опухолевой культуры в ходе экспериментального лекарственного воздействия. Известно, что клетки опухоли в 3D-культуре более устойчивы к химиотерапии, показывают ограниченную способность к поглощению химиопрепаратов, в отличие от клеток в 2D-культуре. Так, антиапоптотический белок Bcl-2 семейства под действием противоопухолевого агента - доцетаксела в монослойной культуре клеток рака легкого обнаруживается в меньшем количестве по сравнению с 3D-культурой, что говорит о более агрессивном и лекарственно устойчивом поведении опухолевых клеток в трехмерных ассоциациях [3].

Различная чувствительность к химиотерапии клеточных культур, выращенных в 2    D- и 3D-режимах, обнаружена и исследована во многих работах. Например, в работе VörsmannH. еtal. [4] при изучении чувствительности TRAIL-рецептора 2D-клеточных линий меланомы к направленной химиотерапии было выявлено, что при сублетальном облучении ультрафиолетом культуры, будучи до этого резистентными к TRAIL-опосредованной гибели, стали чувствительными через активацию каспаза-3-зависимого расщепления X-ассоциированного белка, ингибирующего апоптоз. Сходные, но менее выраженные  результаты были получены при воздействии цисплатина. Но в 3D-клеточной культуре меланомы цисплатин оказался более эффективным активатором TRAIL-опосредованного апоптоза, чем ультрафиолет [4].

В настоящее время  для создания экстраклеточного матрикса для 3D-культур предлагаются различные методические подходы. Первый подход связан с применением компонентов естественных тканей – коллагена, базальных мембран, алгината (вещества, получаемого из водорослей), фибрина, хитозана, клеток соединительной ткани, в т.ч. кератиноцитов. Второй подход связан с использованием синтетических материалов – модифицированных форм гиалуроновой кислоты, полиэтиленгликоля, самоорганизующихся гидрогелей белков, поликапролактона и др. Недостатками природных компонентов являются: биологическое разнообразие, слабая механическая составляющая, риск иммунного ответа или передачи патогенного фактора, невозможность жесткого контроля и независимой модификации свойств, что приводит к возможности диагностических ошибок и отсутствию стандартизированных условий. Главным недостатком синтетических материалов служит низкая биоактивность или ее полное отсутствие [1, 5].

Уже первые методики выращивания трехмерных культур опухолей убедительно обосновали характер роста 3D-культуры опухоли invitro как invivo-подобный. Клеточные популяции в 3D-культуре сохраняли свою гетерогенность, что не отличало полученные опухоли от развивающихся в естественных условиях организма. Так был получен рост в культуре 17 типов опухолей легкого, различных отделов кишечника, кости, шеи, почки, простаты, желудка, щитовидной железы, яичника и яичка, кожи, образцы которых были получены интраоперационно. Рост поддерживался в среде до 100 и более суток. Ткани организма как макро- и микроокружение развивающейся опухоли в данном исследовании заменяли коллагеновым гелем. Дифференциация в культурах опухолей подтверждалась также тем, что при культивировании клеток рака легкого в виде суспензии одни образовывали конгломераты и центры роста во взвешенном состоянии, другие – мигрировали к пластиковым стенкам чашей и образовывали гнезда роста пристеночно, что косвенно может свидетельствовать о большей или меньшей их злокачественности. Культуры опухолей при росте в экспериментальных условиях не потеряли своей злокачественности. Так, в работе FreemanA.E. andHoffmanR.M. [6] при трансплантации 5 млн. клеток меланомы, полученной от больного и культивируемой затем в культуре в течение девяти месяцев, трем тимусэктомированным мышам, у каждой из них выросла опухоль размерами до 1/3 и более от размера самой мыши в течение 2,5 месяцев. То есть объективно было показано сохранение черт злокачественности в 3D-культурах клеток invitro: в коллагеновом геле наблюдался инвазивный рост клеток рака желудка, а клетки меланомы продолжали продуцировать меланин после прекращения пролиферации.

В создании трехмерных тканей, в зависимости от поставленных целей и выбранного оборудования, может быть выделено пять основных направлений: создание платформы со средой, имитирующей микроокружение опухоли, без подложки – для роста опухолевой ткани в виде сфероидов; применение подложек, создающих определенное ограничение в росте; использование гелей, например, полимерных гидрогелей при создании условий для формирования сфероидов опухолевых клеток в модели «подвешенных капель»;создание биореакторов для постоянного контроля биохимического состава среды, в которой формируется опухолевая культура, подачи питательных веществ и отвода продуктов распада, метаболитов; а также использование микрочипов [7]. 3D-подложки обеспечивают поверхность, плотную и упругую среду для роста клеток опухоли, поэтому к ним предъявляется ряд особых требований: пористость, взаимоположение пор, геометрия пор, их размер и распределение. Кроме того, элементы микроуровня опосредуют транспорт, диффузию питательных веществ и метаболитов и даже способны влиять на активность определенных генов и поведение клеток, их пролиферацию и дифференцировку.

Конгломераты клеток (сфероиды) в 3D-культуре представляют собой подобие бессосудистых опухолевых узлов, микрометастазов или межкапиллярных участков солидных опухолей, как было показано в работе HoltfreterJ. [2]. В работе VörsmannH. еtal. [4] на начальном этапе выращивания клеток в 3D-культуре для формирования сфероидов, например злокачественной меланомы, получали капли среды со взвесью клеток методом «подвешенной капли» при соотношении 250 клеток в 25 мкл среды RPMI (Roswell Park Memorial Institute medium). Такие капли помещались на противоадгезионную поверхность чашки Петри с фосфатным буфером. Сфероиды инкубировались в течение 15 дней при 37оС и 5%-м содержании СО2. Через каждые трое суток производилась смена 8 мкл среды каждой капли. Затем, для подтверждения метастатического характера роста определенных клеточных линий меланомы, сфероиды конкретного числа и размера, полученные в каплях, вносили в органоподобные эквиваленты кожи, состоящие из кератиноцитов, фибробластов и коллагена, где на 31 день культивирования сфероиды достигали диаметра в 500 мкм. Полученные сфероиды клеток меланомы при определении терапевтической эффективности лекарственных средств обладали следующими особенностями: количество и размер гнезд роста меланомы в культуре были непредсказуемы; получаемые гнезда роста клеток меланомы в культуре обычно меньше, чем метастазы опухоли в организме; в связи с ограниченной продолжительностью жизни полученных гнезд лечебное воздействие начиналось раньше, и негативное влияние воздействия могло с течением времени накладываться на естественные процессы регрессии роста опухоли [4].

При изучении влияния лекарственных средств в 3D-культуре злокачественных клеток необходимо учитывать такие факторы, как растворимость, химическую и метаболическую стабильность, связывание с белками и захват клетками вещества из среды для детального понимания механизмов терапевтического воздействия invitro. Также важно понимать и неоднородность процессов диффузии и метаболизма клеток внутри опухолевого узла: к центру будет нарастать гипоксия и нехватка питательных субстратов, проявляющиеся градиентом снижения митотической активности и некротическими изменениями, что напрямую ограничивает диффузию лекарственного вещества внутри опухоли. В работе JusticeB.A. etal. [3] были предложены модели роста культур опухолевых клеток с ограниченной диффузией: в виде колоний в коллагеновых гелях, как «гистокультуры» и как клеточные мультислои на 96-луночном планшете с V-образным дном.

В работе SzotC.S. etal.[8] были проведены сравнительные исследования свойств опухолевых клеток в разных клеточных культурах – монослое, 2D- и 3D-культурах на терапевтическое воздействие. Для сравнительной оценки эффективности действия противоопухолевого препарата доксорубицина и наночастиц и степени их поглощения отдельными клетками в монослое и мультиклеточными сфероидами размером 100-300 мкм использовали клеточные линии немелкоклеточного рака легкого. Было установлено, что для подавления роста сфероидов требовались в 60 и более раз большие концентрации таких препаратов, как доцетаксел, цисплатин, гемцитабин, 5-флуороурацил, камптотецин, чем для клеток в монослое. Например, при концентрации доцетаксела в пределах 100-175 мкм общее число сфероидов было на 50% меньше, чем в контроле. При выявлении клеток в состоянии апоптоза (по экспрессии активированной каспазы-3) зафиксировано их меньшее количество в 3D-системе (в 2,09 и 2,47 раза для 5-флуороурацила и камптотецина, соответственно), чем в монослойной культуре. При изучении проникновения доцетаксела и наночастиц внутрь клеток сфероидов установлено, что внутри мультислойных конгломератов оказалось только 10,52 % доцетаксела после двухчасовой экспозиции, а инфильтрирование наночастицами наблюдалось только по периферии сфероидов [8].

Данные, полученные авторами в работе [9],  свидетельствуют о существенных отличиях во взаимоотношениях между самими опухолевыми клетками в монослое и трехмерных культурах, в котором они связаны с экстраклеточным матриксом. Такая связь опухолевых клеток в 3D- моделях и обусловливает их большую лекарственную устойчивость к лекарственной терапии, по сравнению с 2D-культурами, что в результате свидетельствует о большей адекватности 3D- модели роста реальным условиям прогрессии опухоли в организме [9].

Техника выращивания трехмерных клеточных культур постоянно совершенствуется. Так, система Alvetex® предлагает единовременно в одной питательной среде (буквально в одной лунке) выращивать несколько культур (чаще две), как мультислойных, так и монослойных, в различных сочетаниях за счет особой конструкции применяемой посуды, обеспечивающей оптимальный доступ питательных веществ из среды к культурам [10].

В последние годы направление воспроизведения, изучения и применения живых тканей в трехмерном измерении переходит на микроуровень, в том числе на микрочипы. Созданы условия и предпосылки для изучения биологических структур, систем и человеческого организма invitro. Т.н. «орган на чипе» представляет собой микросистему, объединяющую достижения в сфере микрожидкостных технологий и клеточного культивирования с использованием структур микрочипа. При этом используются микроколичества жидкости (от 1/108-1/106 л), которые, проходя по микроканалам системы, позволяют выявить градиенты распределения конкретных веществ в определенных слоях воспроизводимой ткани и даже внутри самой ткани. Такие системы позволяют воспроизводить ключевые структуру, функциональные, биохимические и механические особенности живых органов, таких как легкое, печень, почка, кость, мозг, глаз и др., формировать модели патологии и схемы терапевтического воздействия [11].

Например, «легкое-на-чипе» выглядит как два поли-диметил-силоксановых (т.е. из разновидности силиконовой резины) микрожидкостных канала, разделенных тонкой (10 мкм) и гибкой мембраной из той же силиконовой резины с порами диаметром 10 мкм. В такой микросистеме воспроизводятся циклические эффекты дыхания. Легкое-на-чипе было использовано в исследованиях по нанотоксикологии [12], в которых различные типы наночастиц вводились через воздушные каналы этой микросистемы. Проходя через эпителиальный и эндотелиальный клеточные слои путем трансцитоза, силиконовые наночастицы (12 нм) вызывали цитотоксичность и воспаление, и были напрямую измерены в режиме реального времени в пределах микроканала с помощью микрофлуориметрии. В подобной микросистеме при прохождении опухолевых клеток через поры мембраны были созданы условия для формирования гетероклеточных сфероидов в 3D- микрожидкостной культивируемой системе, что воспроизводило поведение клеток метастатического рака простаты в микроокружении [13]. Подобная стратегия в другом исследовании позволила установить внутрисосудистую адгезию циркулирующих клеток рака груди в ответ на активацию эндотелия цитокином CXCL12 [14].

Таким образом, работа с 3D-злокачественными культурами клеток ведет к индивидуальной, направленной и максимально эффективной противоопухолевой терапии с минимизацией рисков побочных эффектов и неоправданного длительного, часто неэффективного применения химиотерапии. Пока подобная специфика действий в нашей стране остается неразвитой. Более активно по пути создания 3D-тканей, а точнее, выращиванию целых органов, двигается только трансплантология. В настоящее время российскими учеными на базе инновационного центра «Сколково» ведется разработка проекта по определению генетического профиля каждой опухоли, обусловливающего чувствительность/устойчивость конкретного злокачественного новообразования конкретного больного к определенным противоопухолевым препаратам, в результате на основе данных генетики обосновывается выбор определенной таргетной терапии. Однако это довольно дорогостоящий проект, требующий сложного оборудования и создания специализированных программ. В связи с этим, развитие «культурального» направления персонализированной химиотерапии онкологических больных представляется более экономически выгодным и перспективным для  практического применения в медицине.

выращивание костей и сосудов — УЦМС Лечение за рубежом

3D-печать органов в Германии: выращивание костей и сосудов

29 мая 2015г.

Заявление о 3D внутренних органах больше не похоже на научную фантастику, ведь сегодня это является научным фактом – 3D-печать человеческих органов применяется в медицине: 3D-печатные органы уже используются в качестве учебных пособий для будущих хирургов. Но создание функционирующих человеческих живых тканей станет следующим шагом в развитии данной новаторской технологии.

Идея выращивать человеческие органы в лабораторных условиях была высказана учеными много лет назад, и постоянные разработки в этой сфере дали положительный результат. Теперь существует биопечать (печать трехмерных объектов из биологического материала), позволяющая создавать человеческие органы. Однако ученые продолжают активно развивать возможности 3D-технологии печати органов, потому что многие вопросы в этой сфере не нашли ответа. Главной проблемой остается нерешенная задача по налаживанию кровоснабжения искусственных тканей.

Артерии, вены и капилляры просто необходимы всем органам для правильного функционирования, ведь с их помощью различным тканям доставляются питательные вещества в составе крови, которые позволяют сохранять жизнь и здоровье органов. Печатать кровеносные сосуды очень сложно по причине их специфической формы, длины и ширины.

За решение этого вопроса взялись ученые университетской клиники г. Фрайбург (Германия). В настоящее время ими разрабатывается техника печати, делающая возможным изготовление полноценно функционирующих костей из клеток и кровеносных сосудов. Клетки сосудов должны улучшить кровообращение ткани посредством соединения с системой кровообращения пациента. Для развития данной техники Немецкое Исследовательское Общество (DFG) выделило ученым Фрайбурга грант размером в 460 000 евро и сроком на три года. Если данный эксперимент окажется успешным, то в будущем можно будет печатать более крупные образцы искусственной ткани вплоть до целых органов. Ученые считают, что в медицинской практике такой «клеточный принтер» будет использоваться уже через пять-семь лет.

Уникальность разработки заключается в том, что целью ученых стоить напечатать не просто внутренний орган, а кость, снабженную сосудами. Данный выбор был сделан потому, что кость имеет сложную систему кровоснабжения, и если удастся создать костную ткань совместно с сосудами, это станет идеальным решением проблемы. Если это им не удастся, то спектр размеров и типов изготавливаемых образцов будет значительно ограничен.

На сегодня известно, что снабжение искусственно произведенных тканей кровью может быть улучшено при помощи клеток эндотелия. Они выстилают сосуды и способны самостоятельно образовывать новые сосуды. Однако большая часть костных клеток погибает от недостатка кислорода ещё до того, как клетки эндотелия успели образовать сосуды. Данную проблему и будут решать ученые. В итоге, сосуды искусственной ткани вскоре после операции должны начать срастаться с сосудами соседних здоровых тканей и, тем самым, обеспечить кровоснабжение искусственных.

Что даст разработка новаторской идеи 3D-печати живых тканей кости и сосудов? Практическое применение:

1)      Трансплантология.

В мире огромный дефицит донорских органов и создание органов из собственных клеток организма поможет решить эту проблему. Невозможно переоценить способность создавать новые органы непосредственно из собственных клеток пациента.

2)      Замена костей.

В сочетании с 3D-сканированием 3D-принтеры могут создавать любую кость человеческого организма. Создание костей идеально подобранных для пациента значительно улучшает восстановление после пересадки, снижает дискомфорт от использования протеза из собственных тканей, при этом прогнозируется отсутствие побочных реакций организма.

3)      Тестирование медицинских препаратов.

Сейчас абсолютно все медицинские препараты проходят контроль и проверку на животных и людях. Это сопровождается достаточно большими проблемами и значительными затратами. С помощью напечатанных органов можно будет проверить наличие побочных эффектов или негативных реакций на любой препарат. Также эта технология способствует непрерывному развитию медицины.

Данная методика, при успехе этого исследования, будет доступна к концу десятилетия, что существенно облегчит проблему трансплантации костей и костной ткани, поможет в протезировании и обеспечит лучшее качество жизни пациентам в будущем. Компания «Лечение за рубежом» продолжит следить за всеми новыми разработками, которые непрерывно ведутся в лучших клиниках Европы. Мы всегда поможем вам в выборе и подборе профильного медучреждения для решения вопроса здоровья.

Понравилась статья? Поделитесь:

 

Прямое сравнение культивирования в 3D и 2D показывает более высокую остеогенную способность пожилых остеобластов в 3D | Journal of Orthopaedic Surgery and Research

Выделение и культивирование клеток

Первичные остеобласты человека были изолированы из головок бедренных костей 6 пациенток (возраст 75,25 ± 7,6 лет), которым была назначена операция по замене тазобедренного сустава. Информированное согласие было получено от всех участников. Исследование проводилось в соответствии с последней поправкой Хельсинкской декларации.Клетки выделяли и культивировали в монослое в соответствии с нашей стандартной процедурой работы, как описано ранее [22]. Вкратце, губчатая кость была извлечена и промыта три раза. Костные фрагменты помещали в колбы и остеогенную культуральную среду - 10% фетальной телячьей сыворотки (Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия), 1% пенициллин / стрептомицин (PAA, Pasching, Австрия), 50 мкг / мл L-аскорбат-2- Добавляли Phophat (Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия) в модифицированную Дульбекко среду Игла (DMEM) с низким содержанием глюкозы (Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия).Костные фрагменты инкубировали 7 дней при 37 ° C. Затем среду меняли и клетки снова инкубировали еще в течение одной недели. С этого момента среду меняли дважды в неделю. Костные фрагменты удаляли, и остеобласты пролиферировали в монослойной культуре в колбах для культивирования Т75 до пассажа 3, а затем переносили в 2D или 3D культуру. Для монослойного культивирования 1 × 10 4 клеток / см 2 высевали в 24-луночные планшеты. Клетки культивировали в остеогенной культуральной среде - 5% FCS (Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия), 1% pen / strep (PAA, Pasching, Австрия), 10 мМ β-глицеринфосфата (Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия), 1 .56 мМ CaCl 2 (Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия), 100 нМ дексаметазон (Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия), 0,025 M HEPES (PAA, Pasching, Австрия), 0,2 мМ L-аскорбин-2-фосфат ( Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия) в среде DMEM с низким содержанием глюкозы (Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия). Каркас из полистирола толщиной 200 мкм (Alvatex Scaffolds, Reinnervate, Sedgefield, England) использовали в качестве каркаса (22 мм) для 3D-культуры. Характеристики каркаса: подкладка толщиной 13 мкм и лакуны со средним диаметром 40 мкм.Остеобласты высевали в количестве 1,5 × 10 6 клеток на каркас после промывания каркасов 70% этанолом и промывания культуральной средой. Матрицы с засеянными клетками инкубировали в течение 2 часов. После инкубации каркасы помещали в 6-луночные планшеты с 8 мл культуральной среды, как описано выше. Среду меняли через день. Для оценки 3D-культуры каркасы были разделены для получения образцов для каждого исследования. Для оценки 2D-культуры клетки собирали из двух лунок 24-луночного планшета для каждого исследования.Образцы собирали на 0, 3, 7 и 14 дни для проведения анализа активности щелочной фосфатазы (ALP), окрашивания ализарином красным (минерализация), определения сульфородамина B (SRB) и экспрессии генов с помощью ПЦР с обратной транскриптазой (RT-qPCR).

Активность щелочной фосфатазы

Клетки и образцы каркаса в указанные выше моменты времени переносили в раствор щелочного фосфатного субстрата, содержащий 3,5 мМ 4-нитрофенил-фосфат-динатрий-гексагидритную соль (Sigma-Aldrich) в 0.1 мМ буфер ALP (50 мМ глицин, 100 мМ трис-основание, 2 мМ MgCl 2 , pH 10,5 - Sigma-Aldrich) и инкубировали при 37 ° C в течение 30 мин. В качестве отрицательного контроля использовали раствор субстрата ALP без клеток. Поглощение измеряли при 405 нм, и концентрации п-нитрофенола рассчитывали согласно стандартной кривой и делили на содержание белка, рассчитанное с помощью определения SRB [23].

Окрашивание ализариновым красным (минерализация)

Окрашивание ализарином красным и измерения были выполнены для измерения минерализации.Культивируемые клетки фиксировали ледяным 96% этанолом в течение 30 мин в 24-луночном планшете. После двукратной промывки dH 2 O в каждую лунку на 10 мин добавляли 400 мкл окрашивающего раствора ализаринового красного, затем снова промывали четыре раза. Пятно элюировали в течение 20 мин раствором 10% гексадецилпиридиния хлорида (Sigma-Aldrich). Поглощение считывали при 562 нм. Концентрацию ализарина красного для образцов рассчитывали по стандартной кривой, а результаты нормализовали по содержанию белка, проанализированному с помощью окрашивания SRB [23].

Определение сульфородамина B (SRB)

Как упомянуто выше, окрашивание SRB выполняли для нормализации окрашивания ализарином красным и активности ЩФ. Клетки фиксировали метанолом в течение 15 мин при комнатной температуре после удаления культуральной среды и промывания клеток DPBS. Затем добавляли окрашивающий раствор SRB и инкубировали 30 мин при комнатной температуре на шейкере. После удаления окрашивающего раствора SRB и промывания планшетов 1% раствором уксусной кислоты с последующим добавлением 10 мМ небуферизованного раствора TRIS клетки снова инкубировали при комнатной температуре на шейкере в течение 15 мин.Поглощение считывали при 565 и 690 нм. Общий белок в остеобластах рассчитывали с использованием следующего уравнения: Общий белок [мкг / мкл] = (OD-0,036) / 0,036 [24].

Выделение общей РНК и обратная транскриптаза-полимеразная цепная реакция

Композиты «клетка-каркас» и клетки в 2D из каждой группы были взяты и лизированы с использованием реагента TRIzol (Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия) в соответствии с нашей стандартной процедурой [25, 26]. Чистоту и концентрацию общей РНК определяли спектрофотометрически (биофотометр + лоток HELLMA, Eppendorf, Гамбург, Германия).Синтез кДНК [27] выполняли с использованием набора для синтеза первой цепи кДНК (Fermentas, St. Leon-Rot, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Амплификацию с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) проводили и контролировали с помощью Master Cycler S (Eppendorf, Гамбург, Германия).

Условия термоциклирования включали начальные этапы при 98 ° C в течение 3 мин. Стадию амплификации продуктов кДНК проводили с 40 циклами ПЦР, состоящими из стадии денатурации при 98 ° C в течение 10 с и стадии отжига при переменной температуре в зависимости от праймера в течение 10 с.В качестве внутреннего контроля был выбран β-тубулин в качестве гена домашнего хозяйства. Все образцы кДНК (30 нг кДНК) анализировали в двух экземплярах. Амплификацию количественной полимеразной цепной реакции (q-PCR) проводили и контролировали с помощью Q-PCR CFX96 (BioRad, Калифорния, США). Относительную количественную оценку экспрессии генов проводили с использованием сравнительного метода ΔΔCt. Для анализа использовали следующие гены: щелочная фосфатаза (ALP), остеопротегерин (OPG), остеокальцин (OC), остеопонтин (OP) и коллаген типа 1α1 (Col1).Праймеры для амплификации перечислены в таблице 1. Данные экспрессии генов представлены как среднее ± стандартное отклонение анализов ПЦР в реальном времени. Для статистического анализа использовали значения ΔΔCt.

Таблица 1 Человеческие праймеры, использованные для количественной оценки ПЦР

Статистический анализ

Результаты рассчитаны с помощью GraphPad Prism 6. Образцы не имеют нормального распределения; поэтому был проведен непараметрический односторонний тест ANOVA, за которым последовал тест множественного сравнения Тьюки.Статистическая значимость была установлена ​​для p <0,05.

Влияние возраста донора и 3D-культивирования на способность остеогенной дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток жирового происхождения

Активность щелочной фосфатазы

Через 14 дней в 2D-культуре низкая активность ЩФ была обнаружена для молодых AMSC, тогда как значительное увеличение (3.9- fold, p = 0,0494) присутствовала в старых AMSC (рис. 1). По сравнению с молодыми AMSC, старые AMSC показали более высокие уровни ЩФ за все время наблюдения.Например, 9-кратное увеличение (p = 0,0007) уровня ЩФ было получено для старых AMSC через 14 дней в монослойной культуре.

Рисунок 1

Влияние возраста AMSC человека и геометрии культивирования in vitro на активность щелочной фосфатазы (ЩФ). Срок наблюдения до 14 дней. Молодые клетки: средний возраст = 37,5 лет ± 8,6. Старые клетки: средний возраст = 75,8 лет ± 9,2. p <0,05, ∗∗ p <0,01, ∗∗∗ p <0,001, ∗∗∗∗ p <0.0001. Сравнение потенциала минерализации молодых и старых AMSC после периода наблюдения в 14 дней. Обе клетки культивировали как в монослое, так и в 3D-культивировании. Относительная экспрессия гена щелочной фосфатазы (ЩФ) культивируемых AMSC. Сравнение 2D и 3D культур и молодых и старых AMSC после периода наблюдения 7 дней.

В 3D-культуре активность ЩФ показала сходную тенденцию как для молодых, так и для старых AMSC по сравнению с монослойным культивированием. Молодые AMSC показали низкие уровни ЩФ, в то время как старые AMSC показали значительно более высокие уровни ЩФ.В случае старых AMSC, 3D-культивирование показало положительный эффект на уровни ЩФ, поскольку были получены несколько повышенные уровни для всех проанализированных временных точек. По сравнению с полученным базовым уровнем ЩФ (т.е. день 0), 2,4-кратное увеличение было получено для старых AMSC через 14 дней в 3D-культуре (p = 0,0286). Таким образом, 3D-культивирование показало положительный эффект на активность ЩФ AMSC. Это можно четко наблюдать для старых AMSC, у которых после 7 дней культивирования в 3D-системе было получено 2,75-кратное увеличение (p = 0.0401). Кроме того, при сравнении молодых и старых AMSC в 3D-культуре уровни активности ЩФ в старых клетках на 7-й день (12-кратный; p <0,0001) и 14-й день (более 26-кратный; p <0,0001) были значительно выше, чем в молодых клетках. После завершения 14-дневного периода наблюдения активность ЩФ оказалась значительно выше у старых AMSC по сравнению с молодыми AMSC независимо от системы культивирования.

Минерализация

Молодые клетки в 2D-культуре продемонстрировали более высокую минерализацию на 7-й день с последующим заметным снижением на 14-й день (рис.1). С другой стороны, старые AMSC показали непрерывный рост минерализации (в 1,8 раза на 14-й день по сравнению с 0-м днем). Уровень минерализации в однослойной культуре на 14-й день выше в старых клетках, несмотря на увеличение количества молодых клеток на 7-й день. В 3D-культуре обе группы демонстрируют сходные тенденции минерализации. Уровни в старых AMSC были выше (но не статистически значимы) на 14-й день, чем в молодых клетках.

Экспрессия гена

Щелочная фосфатаза

При однослойном культивировании молодые AMSC представляли собой 3.65-кратное увеличение экспрессии гена ALP на 3-й день, затем небольшое снижение на 7-й день (рис. 1). Старые AMSC показали аналогичную тенденцию, но с 12-кратным увеличением на 3-й день (p = 0,0001) и уменьшением на 7-й день. Старые клетки показали повышенную экспрессию ALP по сравнению с молодыми AMSC на 3-й день после культивирования (в 3,3 раза). , p = 0,0024). После 7 дней культивирования наблюдались аналогичные результаты.

После 3D-культивирования старые AMSC показали более низкую экспрессию ALP по сравнению с 2D, но это не было статистически значимым.Аналогичная тенденция наблюдалась с увеличением на 3-й день с последующим отчетливым снижением на 7-й день. Максимальное увеличение экспрессии ALP для этих клеток было обнаружено на 3-й день с 12-кратным увеличением для 2D по сравнению с 3-кратным увеличением. для 3D выращивания. С другой стороны, молодые AMSC показали непрерывное увеличение экспрессии гена ALP в 3D-культуре до 7-го дня. По сравнению со старыми AMSC, молодые клетки показали более низкую экспрессию ALP через 3 дня в 3D-культуре. Однако экспрессия молодых клеток была немного выше после 7 дней культивирования.Наибольшая экспрессия ALP была получена для старых AMSC в 2D-культуре. Подводя итог, можно сказать, что 3D-культивирование не оказало положительного влияния на экспрессию гена ALP. Более того, AMSC, выделенные от старых доноров, показали значительно более высокую экспрессию ALP по сравнению с молодыми донорами.

Остеопротегерин

OPG показал сходный паттерн экспрессии в течение всего времени наблюдения как для молодых, так и для старых клеток в 2D-культуре (рис. 2). Однако экспрессия OPG была выше у старых AMSC по сравнению с молодыми.В старых клетках через 3 дня культивирования было получено 3,6-кратное увеличение (р = 0,0042). Это увеличение экспрессии OPG привело к почти двукратному увеличению экспрессии старых клеток по сравнению с молодыми через 3 дня в монослойной культуре (3,6 раза против 1,9 раза). В 3D-культуре экспрессия OPG была в целом ниже, чем после 2D-культивирования, как для молодых, так и для старых AMSC. Никаких значительных изменений в экспрессии OPG после 3 и 7 дней 3D-культивирования ни для одной из исследованных клеток не обнаружено. Минимальное снижение экспрессии OPG было обнаружено в старых AMSC, но это не было статистически значимым.В целом, более высокие уровни экспрессии OPG были обнаружены в клетках, культивируемых в монослое, по сравнению с клетками в 3D-культуре. Старые AMSC показали наивысшую экспрессию OPG на протяжении всего исследования.

Рисунок 2

Относительная экспрессия генов остеопротегерина (OPG), остеоклацина (OC), остеопонтина (OP) и коллагена типа 1 (Col1) на культивируемых AMSC в течение периода до 7 дней. Сравнение 2D и 3D культур и молодых (средний возраст = 37,5 лет ± 8,6) против старых (75,8 лет ± 9,2) клеток. p <0,05, ∗∗ p <0,01.

Остеокальцин

Экспрессия ОС значительно увеличивалась для молодых AMSC со временем культивирования в 2D. Через 3 и 7 дней культивирования было получено 3,3-кратное и 3,8-кратное увеличение соответственно. Увеличение было статистически значимым для обоих периодов наблюдения по сравнению с исходным уровнем экспрессии (p = 0,0093 для 3-го дня и p = 0,0028 для 7-го дня) (рис. 2). В случае старых AMSC они также выявили повышенную экспрессию OC на 3-й день, но за этим последовало отчетливое снижение на 7-й день.Кроме того, экспрессия ОС была обычно ниже в старых клетках по сравнению с молодыми клетками в монослойной культуре и для всех изученных периодов времени наблюдения. Во время последнего наблюдения 7 дней экспрессия ОС была в 2,6 раза выше для молодых клеток по сравнению со старыми клетками (p = 0,0258) в 2D-культуре. С другой стороны, при культивировании в 3D-культуре молодые и старые AMSC демонстрировали сходные паттерны экспрессии OC. Кроме того, уровень экспрессии ОС был значительно снижен в 3D по сравнению с монослойной культурой.Сравнивая две системы культивирования молодых клеток, в 2D-культуре была обнаружена значительно более высокая экспрессия ОС (на 3-й день 5-кратное увеличение p = 0,0014 и на 7-й день 5-кратное увеличение p = 0,0027). Этот результат аналогично наблюдался для старых клеток, но в меньшей степени. Таким образом, значительно более высокая экспрессия ОС была обнаружена в 2D-культуре по сравнению с 3D-культурой как для молодых, так и для старых AMSC. Молодые AMSC имеют в целом более высокую экспрессию OC, чем старые AMSC.

Остеопонтин

Молодые AMSC не выявили какой-либо детектируемой экспрессии OP в 2D-культуре.Однако снижение экспрессии OP на 86% (т.е. относительно исходного уровня в день 0) наблюдалось для старых AMSC на 7 день (рис. 2). В 3D-культуре молодые клетки показали повышение уровней экспрессии OP после 3 дней культивирования по сравнению с 0-м днем. За этим последовало снижение на 7-й день, близкое к уровням исходного значения (0-й день). Однако для старых AMSC значительное снижение экспрессии OP было получено через 3 дня 3D-культивирования. На 7-й день наблюдалось восстановление уровней экспрессии OP, аналогичных тем, которые были получены в день 0 (исходное значение, отсутствие 3D-культивирования).Значительно более высокая экспрессия OP была обнаружена в молодых клетках по сравнению со старыми клетками. Этот эффект был наиболее выражен через 3 дня культивирования в 3D-культуре (увеличение в 13,8 раза; p = 0,0014). На 7-й день эти уровни только по тренду выше. Кроме того, 3D-культура, по-видимому, стимулирует экспрессию OP для обеих исследованных возрастных групп клеток.

Коллаген типа 1α1

Уровни экспрессии Col1 были почти идентичны между молодыми и старыми AMSC в 2D-культуре (рис. 2). В 3D-культуре 2.4-кратное увеличение экспрессии Col1 наблюдалось у молодых AMSC на 7-й день по сравнению с 0-м днем. С другой стороны, старые AMSC показали снижение экспрессии Col1 на 7-й день по сравнению с 0-м днем ​​(исходный уровень экспрессии). При сравнении экспрессии Col1 для обеих клеток после 7 дней 3D-культивирования молодые клетки экспрессировали Col1 значительно выше, чем старые клетки (p = 0,0004). Основным наблюдением здесь было то, что 3D-культивирование, по-видимому, стимулировало экспрессию Col1, но только при использовании AMSC, выделенных от молодых доноров.

Культивирование клеток меланомы in vitro на трехмерном каркасе, приготовленном на основе желатина

  • 1

    Ареф А., Кампизи М., Иванова Э., Портелл А., Лариос Д., Пиль Б. ., Матур, Н., Чжоу, К., Коукли, Р., Бартелс, А., Боуден, М., Герберт, З., Хилл, С., Гилхули, С., Картер, Дж. И др. , 3D микрофлюидная ex vivo культура сфероидов органотипических опухолей для моделирования блокады иммунных контрольных точек, Lab Chip , 2018, vol. 18, стр. 3129.

    CAS Статья Google ученый

  • 2

    Бресник, А., Вебер Д. и Циммер Д. Белки S100 при раке, Nat. Рак , 2015, т. 15, стр. 96.

    CAS Статья Google ученый

  • 3

    Чен К., Чжао С., Карнад А. и Фриман Дж. Биология и роль CD44 в прогрессировании рака: терапевтические последствия, Hematol. Онкол ., 2018, т. 10, стр. 64.

    CAS Статья Google ученый

  • 4

    Cheng, L., Лопес-Бельтран, А., Массари, Ф., МакЛеннан, Г., и Монтирони, Р., Молекулярное тестирование мутаций BRAF для принятия обоснованных решений по лечению меланомы: переход к точной медицине, Modern Pathol ., 2018, т. . 31, стр. 24.

    CAS Статья Google ученый

  • 5

    Фарук, Т., Метастатическое поведение при меланоме: время, характер, выживаемость и влияющие факторы, J. Oncol. , 2012, т. 2012, стр. 64768.

    Google ученый

  • 6

    Граф, С., Busch, C., Bosserhoff, A., Besch, R., and Berking, C., SOX10 способствует инвазии клеток меланомы путем регулирования активности ингибирования меланомы, J. Invest. Дерматол ., 2014, т. 134, стр. 2212.

    CAS Статья Google ученый

  • 7

    Hayward, NK., Wilmott, JS1., Waddell, N., Johansson, PA, Field, MA., Nones, K., Patch, AM., Kakavand, H., Alexandrov, LB., Burke , Х., Жакрот, В., Казакофф, С., Холмс, О., Леонард, К., и Сабаринатан, Р., Полногеномные ландшафты основных подтипов меланомы, Nature , 2017, т. 11, стр. 175.

    Статья Google ученый

  • 8

    Хилл, Д.С., Робинсон, Н.Д., Кейли, М.П., ​​Чен, М., О'Тул, Э.А., Армстронг, Дж. Л., Пржиборски, С., и Ловат, ЧП, Роман полностью гуманизированная трехмерная кожа, эквивалентная модели ранней инвазии меланомы, Mol. Рак Тер. , 2015, т. 14, стр. 2665.

    CAS Статья Google ученый

  • 9

    Hölzl, K, Lin, S, Tytgat, L, Van, Vlierberghe, S, Gu, L, и Овсяников, A., Свойства Bioink до, во время и после 3D-биопечати, Biofabrication , 2016, т. 23, стр. 032002.

    Артикул Google ученый

  • 10

    Ян Фрешни, Р., Основные принципы клеточной культуры, в Культура клеток для тканевой инженерии , Вуньяк-Новакович, Г. и Ян Фрешни, Р., ред., Wiley, 2006, с. 3.

    Google ученый

  • 11

    Ли, Х., Yuan, C., Hammet, A., Mahajan, A., Chen, ES, Wu, MR, Su, MI, Heierhorst, J., and Tsai, MD, Дифосфотреонин-специфическое взаимодействие между кластером SQ / TQ и FHA в каскаде киназ Rad53-Dun1, Mol. Ячейка , 2008 г., т. 20, стр. 767.

    Статья Google ученый

  • 12

    Люк Дж. Дж., Флаэрти К. Т., Рибас А. и Лонг Г. В. Целевые агенты и иммунотерапия: оптимизация результатов при меланоме, Nat.Преподобный Clin. Онкол ., 2017, т. 14, стр. 463.

    CAS Статья Google ученый

  • 13

    Лайден, Т., Дальберг, Д. и Мартин, М., Создание трехмерных искусственных тканей опухоли меланомы с использованием гидрогелей CellMate ™, FASEB J ., 2018, т. 32, нет. 1 (доп.), Стр. 677,13.

  • 14

    Magdeldin, T., López-Dávila, V., Pape, J., Cameron, GW., Emberton, M., Loizidou, M., and Cheema, U., Разработка васкуляризированной трехмерной модели in vitro прогрессирования рака, Sci.Реп ., 2017, т. 7, стр. 44045.

    Артикул Google ученый

  • 15

    Мюллер И. и Кульмс Д., Трехмерная органотипическая сфероидная модель кожи меланомы, J. Visual Exp ., 2018, т. 18, стр. 135.

    Google ученый

  • 16

    Nanou, A., Crespo, M., Flohr, P., De, Bono, J., and Terstappen, L., Сканирующая электронная микроскопия циркулирующих опухолевых клеток и внеклеточных пузырьков опухолевого происхождения, Cancers , 2018, т.10, стр. 416.

    CAS Статья Google ученый

  • 17

    Naves, LB, Dhand, C., Ong, ST, Gandhimath, C., Venugopal, JR, Almeida, L., Verma, K, N., Lakshminarayanan, R., and Ramakrishna, S., Электроспрядные линейные и разветвленные нановолоконные каркасы для потенциального терапевтического применения при меланоме, J. Cancer Res. Онкобиол ., 2018, т. 1, стр. 113

    Google ученый

  • 18

    Николоваа, П.М. и Чавали С.М., Последние достижения в области биоматериалов для трехмерных каркасов: обзор, Bioact. Материал ., 2019, т. 4, стр. 271.

    Статья Google ученый

  • 19

    Pampaloni, F., Reynaud, E.G, и Stelzer, E.H., Третье измерение устраняет разрыв между культурой клеток и живой тканью, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. , 2007, т. 8, стр. 839.

    CAS Статья Google ученый

  • 20

    Рамголам, К., Lauriol, J., Lalou, C., Lauden, L., Michel, L., de, la, Grange, P., Khatib, AM, Aoudjit, F., Charron, D., Alcaide-Loridan, C. , и Аль-Даккак, Р., Сфероиды меланомы, выращенные в условиях клеток нервного гребня, представляют собой высокопластичные мигрирующие / инвазивные опухолевые клетки, наделенные функцией иммуномодулятора, PLoS One , 2011, т. 15, стр. 18784.

    Артикул Google ученый

  • 21

    Rose, J.B., Pacelli, S., Haj, A.J.E., Dua, H.С., Хопкинсон А., Уайт Л.Дж. и Роуз F.R.A.J., Материалы на основе желатина в тканевой инженерии глаза, Материалы , , 2014, т. 17, стр. 3106.

    Статья Google ученый

  • 22

    Сапудом, Дж., Ульм, Ф., Мартин, С., Кальбицер, Л., Нааб, Дж., Мёллер, С., Шнабельраух, М., Андерегг, У., Шмидт, С., и Помпе Т., Удельное молекулярно-массовое воздействие растворимого и иммобилизованного гиалуронана на экспрессирующие CD44 клетки меланомы в трехмерных коллагеновых матрицах, Acta Biomater., 2017, т. 1, стр. 259.

    Статья Google ученый

  • 23

    Schmidt, S., Schmid, R., Arkudas, A., Kengelbach-Weigand, A., and Bosserhoff, A., Опухолевые клетки развивают определенные клеточные фенотипы после 3D-биопринтинга в различных биочувствительных элементах, Клетки , 2019, т. 8, стр. 1295. https://doi.org/10.3390/cells8101295

    CAS Статья PubMed Central Google ученый

  • 24

    Шайн, А.Х., Бастиан Б.С., От меланоцитов до меланом, Nat. Рак , 2016, т. 16, стр. 345.

    CAS Статья Google ученый

  • 25

    Suvarna, K., Layton, C., and Bancroft, J., Теория и практика гистологических методов Бэнкрофта, электронная книга , Philadelphia: Elsevier, 2018.

    Google ученый

  • 26

    Vörsmann, H., Groeber, F., Валлес, Х., Буш, С., Байссерт, С., Вальчак, Х., и Кульмс, Д., Разработка трехмерной органотипической модели сфероида меланомы кожи человека для тестирования лекарств in vitro, Cell Death Dis. ., 2013, т. 4. e719. https://doi.org/10.1038/cddis.2013.249

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 27

    Wegert, J., Zauter, L., Appenzeller, S., Otto, C., Bausenwein, S., Vokuhl, C., Ernestus, K., Фуртвенглер, Р., Граф, Н., и Гесслер, М., Бластемальная опухоль Вильмса с высоким риском может быть смоделирована с помощью трехмерных сфероидных культур in vitro, Онкоген , 2019, т. 39, стр. 849.

    Статья Google ученый

  • 28

    Сяохун, В., Юкка, Т., Антти, А., Кайджа-Стийна, М., Джоуни, Партанен, П., и Илиперттула, М., Интеграция биоматериалов и методы быстрого прототипирования для интеллектуальных изготовление сложных органов. В: Достижения в области науки о биоматериалах и биомедицинских приложений, IntechOpen , 2003.https://doi.org/10.5772/53114

  • Альтернативное оборудование для выращивания в 3D для установки площадок для выращивания в умном городе

    В связи с появлением все большего количества вертикальных ферм на базе стеллажей в 2016 году компания aponix представила новую форму для выращивания большего количества растений на городских фермах с помощью «вертикального ствола 3D-NFT». Идея заключалась в том, чтобы иметь возможность использовать доступную высоту, максимально использовать трехмерное пространство и использовать естественный солнечный свет, если он есть. К 2021 году решение превратилось в универсальную модульную платформу общего назначения для создания пространств для выращивания всех видов растений, орошаемых вертикальным капельным орошением, из стандартных 2-дюймовых чистых горшков, выращиваемых с помощью отдельного устройства или более крупной интегрированной системы. .

    Одним из изюминок здесь является aponix Plug-Pot, многоразовая альтернатива одноразовым горшкам с пластиковой сеткой, обычно используемым в гидропонике, который также имеет дополнительную металлическую решетчатую вставку для поддержки плодоношения и небольших виноградных культур. В домашнем хозяйстве, где свет генерируется за счет электричества, мы в основном ограничиваемся листовой зеленью, микрозеленью и салатом-латуком. С помощью вертикальных бочек пользователи могут также использовать естественный солнечный свет и выращивать плодоносящие культуры. Помещения для выращивания не предназначены специально для определенных культур, поэтому пользователи могут переключать культуры в любое время в соответствии с индивидуальным спросом и сезоном.

    Используйте стены, чтобы добавить в город больше джунглей
    Зеленая инфраструктура будет все больше и больше требоваться в городских районах. Он будет выполнять множество важных функций, таких как сбор ливневых вод, обеспечение путей и островов для сохранения биоразнообразия, естественное управление микроклиматом и создание более приятной атмосферы в целом. Добавление участков, где также выращиваются съедобные растения, в общественных или полуобщественных местах рядом с декоративными растениями, сделает жизнь людей более зеленой и изменит мир к лучшему.Таким образом, стены по-прежнему используются недостаточно. Взглянув на существующие системы живых стен, компания aponix обнаружила, что существуют особые требования к установке и текущему обслуживанию таких живых стен. Со временем они, вероятно, будут рассматриваться как жизнеспособные и нормальные элементы городской архитектуры и городского планирования. В основе системы aponix living WallSystem лежит строгий принцип «форма следует функции». Он следует тому же подходу и задаче, что и вертикальный ствол: в нем используется очень мало деталей, он очень модульный и прочный, может использоваться снаружи и внутри для выращивания самых разных культур на стенах самых разных типов.Поскольку у него есть дополнительная функция резервуара, его уже планируется включить в проекты по удержанию ливневых вод.

    Новые типы городских ферм
    Aponix рассматривает все свои компоненты как элементы инфраструктуры, которые можно использовать для разработки множества различных решений для выращивания или даже распределения растений, и всегда требует хорошо спланированного внедрения в целевой контекст. Как и в случае с более крупными коммерческими фермами, их более мелкие аналоги также должны быть хорошо спланированы для эффективной работы, а также обеспечивать полезное ценностное предложение в рамках своего городского контекста.

    Находясь очень близко к горожанам, открывает целый ряд новых возможностей, и это лишь некоторые из них:

    · Выращивайте гиперлокальные съедобные растения и используйте альтернативные механизмы распространения, такие как CSA (сельское хозяйство, поддерживаемое общинами), кооперативы или сады для самостоятельного сбора урожая.

    · Обеспечить целенаправленную работу для горожан, занимающихся садоводством в городских джунглях.

    · Совместное обслуживание городской зеленой инфраструктуры.

    · Больше способов, которыми просьюмер может участвовать или выращивать часть своих собственных продуктов.

    Большая часть необходимой технологии уже есть. Но их нужно комбинировать по-новому и в новых форматах, если мы хотим успешно использовать их в городских условиях. Люди поймут это и поддержат это в своих решениях о покупке, если пакет им понравится и у них есть покупательная способность.

    Другой образ мышления
    Переход к этим новым типам производства растений и установок будет иметь много полезных аспектов: пользователи работают вместе, они учатся друг у друга, они узнают об основном биологическом контексте и условиях, как работает природа , а материалы должны циклически перемещаться по цепочкам создания стоимости.Они будут уделять больше внимания областям, где образуются постоянные или токсичные отходы, и они планируют и стараются избегать этого, работая на пути к более осознанной регенеративной диете на основе растений, влияющей также на другие аспекты их повседневной жизни. Любое растение, выращенное и потребляемое в таком контексте, будет выигрышным во многих отношениях.

    Питание и его распределение сложны. Конечно, нам также нужны углеводы и белок. Для них тоже будут умные решения и интеграции. Aponix считает, что если мы предоставим это PFAL, финансируемому венчурным капиталом (фабрики с искусственным освещением), мы просто получим еще несколько продуктов премиум-класса, при этом высший приоритет - денежная прибыль для акционеров.Согласно определению, ведение бизнеса должно быть таким. Вот почему aponix также любит предлагать альтернативы и разнообразие. Чем больше, тем лучше.

    Для получения дополнительной информации:
    Marco Tidona
    Aponix
    [email protected]
    www.aponix.eu

    13 лучших аниме для выращивания, когда-либо существовавших! (20 августа 2021 г.)

    Культивирование - самая популярная и часто используемая концепция в китайском аниме, манхуа и романах. Эти аниме-шоу включают в себя несколько хороших боевых сцен и хорошо написанную сюжетную линию.

    Если вам нравятся эти манхуа или легкие романы, то вы должны проверить этот список лучших аниме для совершенствования, чтобы получить больше впечатлений.

    Лучшее аниме для выращивания!

    13. Истребитель судьбы
    • Китайский Название: Ze Tian Ji
    • Эпизоды: 13

    История о Чен Чаншэн , у которого неизлечимая болезнь, и чтобы вылечить ее, он едет в столицу. Когда он пытается устроить там свой брак по расчету, над ним высмеивают высокомерные молодые хозяева.

    Смотря свысока со стороны этих подонков, Чен решает достичь вершины в мире совершенствования.

    История звучит довольно банально, правда? Он начинается довольно медленно, и темп тоже не такой уж и большой. Если вас интересует только динамичное аниме, посвященное совершенствованию, то можете пропустить и это.

    Если вас интересуют фантастические драмы с хорошими моментами, попробуйте эту.

    12. Великий правитель
    • Китайский Название: Да Чжу Зай
    • Эпизоды: 12

    Великий Тысячный Мир - это место для многих кланов, где они собираются, чтобы засвидетельствовать отображение легенд различными Небесными Владыками.

    Мальчик верхом на Девять Птиц Нижнего Мира прибыл из Северного Духовного Царства, чтобы стать Великим Правителем, к которому стремятся многие люди.

    Da Zhu Zai - фантастическая сюжетная линия, и в этом аниме они изобразили ее довольно хорошо. Каждая сцена насыщенная и очень качественная.

    Это аниме с потрясающими боевыми сценами отправляет вас в чудесное путешествие. Таким образом, это одно из лучших аниме для культивирования.

    11.Царь демонов преследует свою жену
    • Китайский Название: Xie Wang Zhui Qi
    • Эпизоды: 13

    После того, как ее предал человек, которого она любила, Су Ло спрыгнула со стальной скалы и проснулась в теле четвертого промаха, кто известен как ни на что не годный.

    Принц Джин - существо непревзойденное, известное своей жестокостью и безжалостностью. Он находит характер Су Луо интересным, но сможет ли она снова влюбиться, особенно в свой недавний опыт?

    Первое, что вам понравится в этом аниме, - это его сюжет и слишком впечатляющий способ его изображения.Культивирование в аниме не уникально, но используется хорошо.

    Если вы ищете лучшее аниме для самосовершенствования, которое может утолить вашу скуку, то это может быть вашей чашкой чая.

    10. Мастер духовного меча
    • Китайский Название: Ling Jian Zun
    • Эпизоды: 200

    MC подвергается нападению и становится самым слабым юным лордом. Он все еще злится на врага, убившего его в предыдущей жизни.

    К тому времени, когда Дух духа станет мощным, он станет верховным на небе и на земле.Так что он ждет момента.

    Если вы поклонник аниме о боевых искусствах и хотите немного развиться в нем, это однозначно для вас.

    Главный герой потрясающий, история достойная, и вы получите несколько невероятных боевых сцен, которые будут развлекать вас до конца.

    9. Повседневная жизнь бессмертного короля
    • Китайский Название: Сиань Ван де Ричанг Шенхуо
    • Эпизоды: 15

    Ван Лин - гений самосовершенствования, который прорвался через новое царство каждые два года с момента своего рождения.

    Но его величайшая битва только начинается, когда он собирался поступить в свою старшую школу , и проблем в его жизни становится все больше и больше.

    Если хотите сменить темп, как насчет просмотра комедийного аниме на тему совершенствования на тему комедии? Это рискованно, весело и не отклоняется от концепции совершенствования.

    Я как-то чувствую некоторую связь между этим аниме и « The Disastrous Life of Saiki K ». Это аниме будет стоить потраченного времени.

    8. Техника Звездного Боевого Бога
    • Китайский Название: Xing Wushen Jue
    • Эпизоды: 40

    Мир состоит из Двенадцати Путей , ведущих на путь бессмертия. После того, как мир претерпел ужасные изменения, остались лишь несколько боевых искусств.

    Это три: Flame , Dragon и Star Martial Arts . Посмотрите, как ведущий совершает свой путь к бессмертию вместе со своим прекрасным гаремом.

    Вы не ослышались. В этом аниме есть гарем, и я не думаю, что это вас сильно беспокоит. В нем есть несколько хороших боевых сцен с боевыми искусствами, а также концепция совершенствования.

    Если у вас есть несколько надоедливых персонажей, вам понравится это аниме с его подробным сюжетом и хорошей анимацией.

    7. Сказки о демонах и богах
    • Китайский Название: Яо Шени
    • Эпизоды: 172

    Ни Ли обнаруживает себя в 13-летнем теле от двери смерти из-за деформации пространства-времени.Вроде все сбросилось.

    Сможет ли он в этой второй жизни защитить всех, кого не смог в предыдущей жизни? Или судьба останется прежней?

    Если вы фанат сказок о демонах и богах маньхуа, возможно, он вам не очень понравится. Конечно, анимация уступает оформлению.

    Тем не менее, это довольно хорошее аниме для культивирования, и мы уверены, что если вы не читали мангу заранее, вам понравится это аниме.

    6. Универсальный маг
    • Китайский Название: Quanzhi Fashi
    • Эпизоды: 48

    Мо Фань попадает во вселенную, где наука заменена магией, и в этой жизни он сын бедного рабочего и брат сестры-инвалида.

    Он записывается в известную академию магии и вскоре становится посмешищем для своего положения. Но когда он пробуждает двойных стихийных способностей , какие опасности подстерегают его?

    Я не уверен, можно ли это назвать аниме совершенствованием, но насколько я знаю, совершенствование относится к оттачиванию определенных способностей с помощью таких вещей, как ядро.

    Итак, Versatile Mage в значительной степени то же самое, и у него хороший сюжет, характер, а главный герой довольно OP.

    5. Мастер легендарных миров
    • Китайский Название: Ван Цзе Сянь Цзун
    • Эпизоды: 176

    История следует за Е Синьюнь , который идет по пути восстановления своего королевства после того, как его предок вознесся на небеса.

    Но с его силой он не может одолеть правителя династии Ци Ваня. Итак, он решает изменить свою личность как незаконнорожденного сына Ци Ванга и ждет возможности.

    Wan Jie Xian Zong - это фантастическое аниме с множеством хороших боевых сцен. Если вы любили романы о самосовершенствовании / манхуа, то вам тоже понравится этот.

    Может быть, не так хорош, как манхуа, но определенно лучше, чем live-action. Так что попробуйте.

    4. Боевая Вселенная
    • Китайский Название: Wu Dong Qian Kun
    • Эпизоды: 24

    История разворачивается в мире, где уважение зарабатывается силой, и молодой Лин Дун наблюдал, как гений убивает всю его семью. клан Линь.

    Обладая лишь решимостью и силой воли, он решает отомстить за свою семью. Позже он натыкается на загадочный каменный талисман , который ведет его к великой судьбе.

    Если вам нравится аниме, в котором MC теряет все и становится сильнее из-за своей слабости, Wu Dong Qian Kun - это то, что вам нужно посмотреть. .

    У него прекрасная сюжетная линия, анимация, сделанная студией Tencent , одна из лучших, и вы получите массу удовольствия от этого захватывающего аниме для совершенствования.

    3. Система подонков
    • Китайский Название: Чуан Шу Цзыцзю Чжинан
    • Эпизоды: 10

    Шен Юань всегда любил читать романы Сянься, и он знает, что на каком-то этапе главный герой идет демоническим путем.

    Вскоре он переселяется в мир, где он не главный герой, а хозяин отморозков, которому суждено умереть от рук MC.

    Это аниме показывает, насколько хорошим может быть шоу, если команда приложит все усилия, чтобы донести лучшее из каждой сцены.

    Они не сильно отклонились от романа, и каждая сцена кажется фантастической. В целом, это чрезвычайно увлекательное и лучшее аниме для совершенствования, которое вы можете встретить.

    2. Земля души
    • Китайский Название: Дулуо Далу
    • Эпизоды: 143

    Тан Сан , вундеркинд секты Тан, был вынужден спрыгнуть с Пик Ада за кражу запрещенных техник секты. Но он возрождается в мире, наполненном духами.

    Рожденный с самым бесполезным духом, с нетронутыми воспоминаниями о прошлой жизни, сможет ли он завоевать этот мир и стать сильнейшим?

    Soul Land - отличное аниме, и даже читатели манхуа согласятся с этим утверждением. Анимация уникальна для японского аниме, но потрясающая.

    Концепция выращивания используется эффективно, и сцены действия также великолепны. Таким образом, это одно из лучших аниме для культивирования.

    1. Основатель Diabolism
    • Китайский Название: Мо Дао Зу Ши
    • Эпизоды: 23

    Вэй Усянь , основатель Демонической секты, погиб от рук самых дорогих кланов.Через несколько лет он воплотился в тело сумасшедшего.

    Вместе с Лань Ванцзи , своим лучшим другом и бойфрендом, он отправляется в путешествие, чтобы найти виновника, посеявшего хаос в их жизни.

    Mo Dao Zu Shi - лучшее китайское аниме или драма, которые я видел. В нем есть элементы BL, но это не остановит вас от просмотра, потому что мы отправим их дорого.

    Идея выращивания довольно удивительна, без каких-либо сложностей, и со сладкой романтикой, немного таинственностью, она до конца развлекает зрителя.

    Слово от нас!

    Все аниме «Совершенствование» состоят из нескольких хороших боевых сцен, и, поскольку большинство из них адаптировано из известных романов, вам понравятся эти истории.

    Итак, что вы думаете о нашем списке? Ваш любимый роман "Совершенствование"? Сообщите нам, что вы думаете, в разделе комментариев ниже.

    Вам также может понравиться:

    Посетите аниме-сообщество Индии - Аниме Укиё для получения дополнительной информации!

    Чтобы быть в курсе последних новостей и обзоров аниме, подписывайтесь на Anime Ukiyo на Twitter , Facebook , Instagram и Pinterest Телеграмм канал .

    3D китайского аниме, которое поклонники Дунхуа должны посмотреть

    Я знаю, что многие из вас ищут новое китайское аниме, чтобы добавить в свой список наблюдения, и я почти уверен, что вы уже слышали некоторые из самых известных рекомендаций. Однако, если вы хотите обнаружить некоторые жемчужины в китайской анимации, я настоятельно рекомендую вам проверить 3D-дунхуа. В отличие от японской анимации, 3D широко используется и распространен как формат среди китайских аниме как в сериалах, так и в фильмах.

    Поэтому я хотел бы поделиться некоторыми недооцененными, но ценными жемчужинами китайского 3D-аниме.Хотя некоторые из этих названий могут показаться вам знакомыми, я также включу 3D donghua, который сделал себе имя, просто чтобы представить, что CG анимированный donghua также может противостоять 2D. Фактически, большинство сериалов и фильмов в китайской анимации в настоящее время создаются в 3DCG, хотя за пределами Китая они не привлекают столько внимания, как «Аватар короля», Мо Дао Зу Ши и многие другие.

    Хорошо, без лишних слов, давайте проверим наш список трехмерных китайских аниме, которые фанаты дунхуа должны добавить в свои списки наблюдения:

    Дулуо Далу (Земля душ)

    А теперь вот китайское аниме, которое не недооценен в любом смысле, но определенно стоит проверить.Адаптация дунхуа Soul Land - самое популярное китайское аниме сейчас в Китае и одна из самых популярных игр Tencent. Наполненный действием, романтикой и красивым дизайном персонажей, чего еще мы можем попросить от этого дунхуа с его исекаем и талантом культиватора. Soul Land - один из моих первых дунхуа, и если вы хотите посмотреть похожие сериалы, посетите наш пост здесь: Chinese Anime Like Soul Land

    Qin Shi Ming Yue (Qin's Moon)

    Если вам нравится 3D китайское аниме , Qin's Moon или The Legend of Qin - это дунхуа, который вы не должны пропустить.В последние годы он был стандартом для 3D-анимации в Китае с момента его премьеры в 2007 году. Анимация создана Sparkly Key Animation (той же студией, что и Soul Land и Legend of Tang, и одной из лучших китайских аниме-студий в настоящее время), качество анимации просто с каждым годом становится лучше. С более чем сотнями эпизодов «Луна Цинь» - это фантастическое путешествие, наполненное действиями, интересными персонажами, современными китайскими ценностями и философией, а также увлекательной музыкой.

    Doupo Cangqiong (Battle Through the Heavens)

    Я хотел бы подчеркнуть одно из моих самых ранних влияний на китайское аниме, Battle Through The Heavens - это забавный дунхуа с хорошими боевыми сценами и убедительной драматургией. Первый сезон был в лучшем случае довольно посредственным, но он становится лучше, когда вы дойдете до сезона 2 -го этого дунхуа. Что касается сюжета, он довольно общий, но я могу поручиться за это, поскольку его исходный материал - один из моих любимых китайских веб-романов всех времен

    NeZha Zhi Mo Tong Jiang Shi (Nezha: The Devil's Birth)

    Следующим в нашем списке идет самый кассовый анимационный фильм в Китае.С колоссальным доходом в размере более 700 миллионов долларов, он побил различные рекорды кассовых сборов в Китае в прошлом 2019 году. Это драматическое и убедительное повествование о классической китайской легенде, украшенное красивой анимацией, фантастическими сценами боев, задушевными диалогами и очаровательным саундтреком. Ранее мы указали NeZha как один из наших китайских аниме-фильмов для начинающих в сообществе дунхуа.

    Бай Шэ: Юань Ци (Белая Змея: Происхождение)

    Вот еще один китайский 3D аниме-фильм от 2019 года, Белая Змея: Происхождение, является пересказом популярной китайской сказки Белая Змея, несмотря на то, что будучи демоном, она влюбилась в человека; История этих влюбленных, помешанных на звездах, пересказывалась много раз, но анимационный фильм 2019 года - это захватывающий и захватывающий опыт.С великолепной анимацией, визуально ошеломляющей графикой, красивым саундтреком и эффектным повествованием обычного романа, White Snake: The Origin является обязательным для просмотра каждым фанатом дунхуа.

    Qin Shi Ming Yue: Tian Xing Jie Ge (Девять песен движущихся небес)

    Мой личный фаворит, Nine Songs of the Moving Heavens - спин-офф и приквел к фильму Qin. Луна, а эта мне нравится больше, чем основная серия.Политическая война и придворные интриги, красивые персонажи, завораживающие сцены боев; Nine Songs of the Moving Heavens - захватывающий опыт для фанатов, которые ищут абсолютно потрясающий трехмерный донхуа.

    Wu Dong Qian Kun (Martial Universe)

    Подобно Battle Through The Heavens, Martial Universe - еще одно культивированное китайское аниме, которое понравится людям. Довольно приличная предыстория, прогрессивное развитие персонажей, Martial Universe имела всю формулу, которая должна быть в каждом 3D donghua .

    Тиан Бао Фу Яо Лу (Legend of Tang)

    Одна из самых популярных донхуа 2020 года из Билибили, Legend of Tang - это великолепный 3D-донхуа от Sparkly Key Animation. Основанная на любимом романе о любви мальчиков, Legend of Tang предлагает красиво оформленных мужских персонажей, которые покорят ваши сердца, а сцены сражений тоже довольно приличные. В настоящее время он транслируется bilibili на их канале YouTube: Anime by bilibili

    Wu Geng Ji (The Legend and the Hero)

    Wu Geng Ji, еще одно популярное 3D-китайское аниме от Sparkly Key Animation, премьера которого состоялась несколько лет назад.Это одно из ведущих китайских аниме о боевых искусствах за последние годы. Это один из дунхуа, который я настоятельно рекомендую людям, которым также нравится Soul Land.

    Ling Long: INCARNATION (Клетка духа: INCARNATION)

    Погодите, в нашем списке тоже была научная фантастика, и здесь у нас есть Ling Long: INCARNATION. Я знаю, что большая часть китайской 3D-анимации - это культивирование или боевые искусства в этом жанре, но у нас также было много научной фантастики в этом формате, и Ling Long: Incarnation - одна из самых амбициозных.Известное как одно из самых дорогих китайских аниме 2019 года, оно вращалось вокруг постапокалиптической обстановки, в каждой сцене которой разворачивались тонны экшена и драмы.

    Xixing Ji (Путешествие на Запад)

    Я знаю, что вы, ребята, хорошо знакомы с Journey to the West, это история, которая была адаптирована во многих средах и пересказана несколько раз, но Xixing Ji, китайское аниме 2018 года в 3D формат придает другой поворот в этой классической истории. Я должен сказать, что это обязательное место для просмотра дунхуа, который любит смотреть боевик, комедии и боевые искусства.

    Xixing Ji: Zaijian Wu Kong (The Westward)

    Если вы закончили первые 2 сезона сериала Xixing Ji donghua, я также хотел бы порекомендовать его приквел-фильм Xixing Ji: Zaijian Wu Kong или также известный как The Westward. Tencent Video добавила его в свой архив в мае 2020 года.

    Фэн Юй Чжоу (Стражи ветра)

    Стражи ветра - это китайский аниме-фильм 2018 года в формате 3D , который порадует поклонников дунхуа, которые ищут приключение.

    Мэн Та: Сюэ Ми Ченг (Башня грез)

    Вот еще одно динамичное китайское 3D-аниме, премьера которого состоялась в 2018 году, я действительно наслаждался перестрелками в этом дунхуа. К тому же дизайн персонажей был красивым.

    Шао Нянь Гэ Син (Юношеская песня)

    Также известный как Великое путешествие подростка, что, на мой взгляд, звучит странно, Шао Нянь Гэ Син рассказывает историю, наполненную действиями, драмой, романтикой и многим другим. более.

    Xing Cheng Bian (Stellar Transformations)

    Одно из лучших и чистых китайских аниме xianxia, ​​Stellar Transformations или также известное как The Legend of Immortal, является фантастическим культивированием donghua. Пока есть только 2 сезона, однако он должен вернуться в сезон -го -го и один из самых долгожданных китайских аниме 2021 года .

    Wanjie Xianzong (Страна чудес)

    Wonderland - еще одно поразительное китайское аниме в 3D, которое стоит подражать поклонникам самосовершенствования и жанра боевых искусств.Он имеет тот же сюжет, что и любой другой дунхуа в этом списке, но также предлагает разнообразную историю. Всего в стране чудес 4 сезона, и она отлично подходит для любителей выпивки.

    Яо Шэнь Цзи («Сказки о демонах и богах»)

    Еще один боевых искусств и культивирования дунхуа в этом списке - «Сказки о демонах и богах», которые охватывают более 4 сезонов и имеют более сотни доступных эпизодов. Напоминает историю исекай, но на этот раз главный герой вернулся в свои юные дни и должен отправиться в путешествие, чтобы заново прожить свою жизнь.

    Wanjie Shenzhu (Lord of the Universe)

    Lord of the Universe - это китайское аниме с главным героем ОП и одно из моих любимых в этой постановке. Это следует за историей о древнем боге, который лишился благодати, но нашел свой путь в новый мир, где он стал огромным существом. Там его авторитет будет поставлен под сомнение, поскольку его прошлое снова будет преследовать его.

    Fanren Xiu Xian Chuan (Путешествие смертных в бессмертие)

    Вот китайское аниме из линейки bilibili 2020 года.Премьера состоялась в июле прошлого года в рамках модельного ряда donghua на лето 2020 года вместе с Fog Hill of Five Elements и The Legend of Tang. Путешествие смертного к бессмертию - это еще одно дунхуа совершенствования, в котором рассказывается история молодого человека, который стремится достичь вершины мира практикующих, несмотря на то, что у него меньше талантов по сравнению со своими сверстниками.

    Wushen Zhuzai (Мастер боевых искусств)

    Wushen Zhuzai или Мастер боевых искусств напоминает мне Мо Дао Цзу Ши, потому что, как и Вэй Усянь, главный герой этого китайского трехмерного аниме был предан своими друзьями и подвергнут преследованиям. смерть и возвращение к жизни через сотни лет.Это история кровавой мести и легендарного опыта совершенствования.

    Помимо того, что я упомянул выше, я также хотел бы порекомендовать следующее китайское 3D-аниме, и я очень надеюсь, что вы найдете здесь еще несколько скрытых жемчужин из этого списка:

    • Сюэ Инь Линчжу (Лорд Сюэ Ян / Снежный Орел Лорд)
    • Шань Хэ Цзянь Синь (Тысяча Осен)
    • Perfect World
    • Зеркало: Города-близнецы
    • Главный манипулятор душ
    • Остров Силиан
    • Ван Го Чжи (Крылья мира)
    • Нижуань Цзюань : Аль Цзюэци (Изменившееся измерение: Возвышение Ала)
    • Цзюэминь Сяньин (Смертельный ответ)
    • Бэн Хуай Син Хэ (Разрушитель Галактики)
    • Доу Хун Вэй Чжи Сюань Юэ Ци Юань (Духовные хранители)
    • (Лин Цзянь Цзунь) Повелитель меча духов)
    • Рыцари на обломках
    • Черный отряд

    На этом я закончу список китайских 3D-аниме, которые люди должны посмотреть.Я буду обновлять этот список время от времени, как только будет объявлено о новом дунхуа, а также по мере того, как я буду расширять свои знания об этом аспекте китайской анимации. Если вы хотите добавить несколько предложений в этот список, сообщите нам об этом, оставив свои комментарии ниже, и мы обязательно его проверим.

    Вам также может понравиться:

    • Кодовое имя: Ю Алексиус - неоднозначная личность, которая любит говорить об аниме и китайской анимации в целом. Ненасытная душа из Жемчужины Востока, разочарованный писатель и мечтающий стать Хоутару Ореки.Он кусок сумасшедшего и всего сумасшедшего.

      Посмотреть все сообщения

    Гибкая 3D-модель для культивирования эмбриональных и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека

    Ян-Ру Лу (доктор философии), Университет Хельсинки, Финляндия

    Введение

    В последние годы наблюдается стремление отойти от традиционных 2D-систем культивирования клеток к тому, что считается более физиологически релевантными трехмерными (3D) моделями.Считается, что клетки, культивируемые в 3D, более точно имитируют клеточную нишу in vivo, которая поддерживает пролиферацию клеток. Здесь мы представляем трехмерную модель, которая была разработана для культуры эмбриональных стволовых клеток человека (hESC) и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPCS), где линии hESC WA07 и H9-GFP (модифицированные из H9) и клетки iPCS (IMR90) -4 были использованы для исследования. Клетки культивировали в GrowDex® в течение 9 дней в формате 96-луночного планшета, где наблюдали и сообщали о скорости пролиферации клеток и формировании сфероидов.Сфероиды представляют собой полезную трехмерную модель для изучения болезненных состояний, таких как рак, и предлагают простую в использовании платформу для открытия лекарств и исследований в области регенеративной медицины. Разработка анализа в формате 96-луночного планшета позволяет легко переносить его в автоматизированные системы для увеличения масштабов и повышения производительности, необходимых для высокопроизводительного скрининга (HTS).

    Материалы

    • H9-GFP, модифицированный из H9 (WA09, WiCell) WA07 и iPS (IMR90) -4 (WiCell)
    • среда mTeSR1 (STEMCELL Technologies)
    • GrowDex 1.5% (UPM)
    • Диспазес раствор 1 мг / мл (STEMCELL Technologies)
    • Набор для определения живой / мертвой жизнеспособности / цитотоксичности (Invitrogen)

    Метод

    1. Исходный гидрогель GrowDex разбавляли культуральной средой до концентрации 0,5%.
    2. Клетки, предварительно засеянные и культивированные в 2D, отделяли от культурального сосуда неферментативным реагентом для диссоциации клеток и собирали центрифугированием при 200 g в течение 5 мин.
    3. Супернатант удаляли и осадок осторожно ресуспендировали в культуральной среде.ЧЭСК были засеяны как небольшие колонии, а не как отдельные клетки или небольшие группы клеток. Небольшие колонии генерировали, пропуская их через наконечник пипетки на 1000 мкл примерно 10 раз.
    4. Плотность посева клеток, использованная для 3D-культуры в GrowDex, была в пять раз выше, чем у 2D-культуры до пассажа. Соответствующее количество колоний смешивали с осторожным переносом пипетки GrowDexby и медленным перемешиванием кончиком пипетки в растворе для обеспечения равномерного распределения колоний в геле.
    5. 100 мкл смеси клеток / GrowDex переносили в каждую лунку 96-луночного планшета и осторожно добавляли 100 мкл культуральной среды поверх смеси клеток / GrowDex, чтобы гарантировать, что гель не нарушился.
    6. Клетки поддерживали в течение 9 дней при 37 ° C с 5% CO2 во влажной атмосфере. Питательную среду обновляли ежедневно.
    7. Жизнеспособность клеток
    8. оценивали с использованием набора для определения жизнеспособности / цитотоксичности живых / мертвых клеток в соответствии с инструкциями производителя, а образование сфероидов наблюдали с помощью стандартной микроскопии.

    Результаты

    Здесь мы предлагаем новую концепцию культуры hPSC, которая представляет собой гибкую, свободную от ксено трехмерную систему культивирования in vitro. Мы продемонстрировали, что клетки можно успешно культивировать, сохранять жизнеспособность клеток и формировать сфероиды размером от 100 до 200 нм. В отличие от большинства гидрогелей на основе полисахаридов, которые требуют отдельной стадии сшивки, GrowDex можно использовать после простого разбавления средой. Кроме того, гидрогели, полученные путем сшивания, имеют фиксированные физические свойства, тогда как физические свойства GrowDex зависят от его концентрации, определяемой разбавлением, а не от степени сшивания.Фазово-контрастные изображения показывают, что плотность клеток и диаметр сфероида увеличиваются со временем культивирования. Клетки в трехмерных сфероидах оставались живыми во время культивирования, как показано в анализах жизнеспособности живых / мертвых в конце субкультур.

    Рисунок 1. Эмбриональные стволовые клетки человека (чЭСК) и индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) образуют трехмерные (3D) сфероиды в GrowDex. Временной график показывает, что клетки WA07 (A) и iPS (IMR90) -4 (B) сформировали трехмерные сфероиды в 0.5.% GrowDex. Живые / мертвые окрашенные изображения показывают живые клетки WA07 (C) и iPS (IMR90) -4 (D) в сфероидах на 9 день. Масштабные полосы = 200 мм. Воспроизведено с разрешения (1). Авторское право, 2014 г., Мэри Энн Либерт, Inc.

    Заключение

    Это исследование показывает, что GrowDex может предложить гибкую, свободную от ксено трехмерную модель для культивирования клеток hESC и iPS и открывает новые возможности для лучшего воспроизведения естественной среды ESC и эмбрионального развития. Ранее это было невозможно с помощью традиционных методов 2D-культивирования.



    (1) Lou Y-R et al. 2014 «Использование гидрогеля нанофибриллярной целлюлозы в качестве гибкой трехмерной модели для культивирования плюрипотентных стволовых клеток человека. СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ И РАЗВИТИЕ 23: 4, стр. 380-392.

    .
    Опубликовано в категории: Разное

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *